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發布時間:2020-09-18 07:09  
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PCR實驗室是分子診斷的基礎,也是進行PCR實驗的必備場所。近些年,分子診斷行業快速發展,對PCR的認識又進入到了一個新的階段,但是基于實驗室的基本知識仍然是非常重要的一環。
PCR實驗室注意事項——標本制備區
由于在樣本混合、核酸純化過程中可能會發生氣溶膠所致的污染,可通過在本區內設立正壓條件,避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染。
PCR實驗室注意事項——擴增產物分析區
用過的吸頭也必須放至1 mol/L HCl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序處理,如焚燒。由于本區有可能會用到某些可致基因突變和有毒物質,故應當注意實驗人員的安全防護。
PCR實驗室工作基本原則
1.進入各工作區域應當嚴格按照單一方向進行
試劑儲存和準備區→標本制備區→擴增區→ 擴增產物分析區。
2.各工作區域必須有明確的標記,不同工作區域內的設備、物品不得混用。
實驗室的清潔應當按試劑貯存和準備區→標本制備區→擴增區→擴增產物分析區的方向進行。不同的實驗區域應當有其各自的清潔用具以防止交叉污染。
由于紫外照射的距離和能量對去污染的效果非常關鍵,因此可使用可移動紫外燈(254nm波長),在工作完成后調至實驗臺上60~90cm內照射。
核酸擴增后產物的分析方法多種多樣,如膜上或微孔板或芯片上探針雜交方法直接或酶切后瓊脂糖凝膠電泳、Southern轉移、核酸測序方法、質譜分析等。
為避免樣本間的交叉污染,加入待測核酸后,必須蓋好含反應混合液的反應管。對具有潛在危險性的材料,必須在生物安全柜內開蓋,并有明確的樣本處理和滅活程序。
PCR實驗室布局
實驗材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等,只能從擴增前區流向擴增后區,即從試劑準備區→樣品制備區→擴增區→擴增產物分析區,不得逆向流動。