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發布時間:2021-07-04 12:22  
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DNA提取試劑盒是根據氯化芐法構建的,能夠從樣本中提取基因組DNA的試劑盒。氯化1芐具有能將含有纖維素等的細胞壁中的羥基芐基化,從而破壞細胞壁的特性。本制品利用了氯化1芐的這一特性,將植物樣品凍結融解后,再使用Pipet Tip的尖1端將植物樣品在Microtube壁上數次按壓即可破壞細胞壁。本法與傳統方法相比,省去了液氮研磨等煩瑣步驟,有利于一次性處理大量樣品。而且,本制品經過了改良,熱處理時間只需15分鐘,使用本制品從實驗開始至水相回收只需30分鐘時間。得到的基因組DNA可以進行PCR擴增及限制酶處理等。
DNA提取試劑盒主要可以分為以下幾大類:小量全血基因組DNA提取試劑盒、中量全血基因組DNA提取試劑盒、組織/細胞基因組DNA提取試劑盒、中量/大量組織/細胞基因組DNA提取試劑盒、全血/組織/細胞基因組DNA提取試劑盒、CTAB植物基因DNA提取試劑盒、新型植物基因組DNA提取試劑盒、酵母基因組DNA提取試劑盒、M13噬菌體單鏈基因組DNA提取試劑盒。
核糖核酸(縮寫為RNA,即Ribonucleic Acid),存在于生物細胞以及部分病毒、類病毒中的遺傳信息載體。RNA由核糖核苷酸經磷酸二酯鍵縮合而成長鏈狀分子。一個核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和堿基構成。RNA的堿基主要有4種,即A(腺piao呤)、G(鳥piao呤)、C(胞C4H4N2)、U(尿C4H4N2),其中,U(尿C4H4N2)取代了DNA中的T。核糖核酸在體內的作用主要是引導蛋白質的合成。
人體一個細胞含RNA約10pg(含DNA約7pg)。與DNA相比,RNA種類繁多,分子量較小,含量變化大。RNA可根據結構和功能的不同分為信使RNA和非編碼RNA。非編碼RNA分為非編碼大RNA和非編碼小RNA。非編碼大RNA包括核糖體RNA、長鏈非編碼RNA。非編碼小RNA包括轉移RNA、核酶、小分子RNA等。小分子RNA(20~300nt)包括 miRNA、 SiRNA、 piRNA、scRNA、 snRNA、 snoRNA等,細菌也有小分子RNA(50~500nt)。
用乙醇沉淀DNA時為什么一定要加NaAc或NaCl
在pH為8左右的溶液中,DNA分子是帶負電荷的,加一定濃度的NaAc或NaCl,使Na 中和DNA分子上的負電荷, 減少DNA分子之間的同性電荷相斥力,易于互相聚合而形成DNA鈉鹽沉淀,當加入的鹽溶液濃度太低時, 只有部分DNA形成DNA鈉鹽而聚合,這樣就造成DNA沉淀不完全,當加入的鹽溶液濃度太高時, 其效果也不好。在沉淀的DNA中,由于過多的鹽雜質存在,影響DNA的酶切等反應,必須要進行洗滌或重沉淀。
加核糖核酸酶降解核糖核酸后,為什么再要用SDS與KAc來處理?
加進去的RNase本身是一種蛋白質,為了純化DNA,又必須去除之,加SDS可使它們成為SDS-蛋白復合物沉淀,再加KAc使這些復合物轉變為溶解度更小的鉀鹽形式的SDS-蛋白質復合物,使沉淀更加完全。也可用飽和酚、*抽提再沉淀,去除RNase。在溶液中,有人以KAc代替NaAc,也可以收到較好效果。
在基因操作實驗中,磷酸鹽緩沖系統(pKa=7.2)和硼酸系統(pKa=9.24)等雖然也都符合細胞內環境的生理范圍(pH),可作DNA的保存液,但在轉化實驗時,磷酸根離子的種類及數量將與Ca2 產生Ca3(PO4)2沉淀,在DNA反應時,不同的酶對輔助因子的種類及數量要求不同,有的要求高離子濃度,有的則要求低鹽濃度,采用Tris-HCl(pKa=8.0)的緩沖系統,由于緩沖液是TrisH /Tris,不存在金屬離子的干擾作用,故在提取或保存DNA時,大都采用Tris-HCl系統,而TE緩沖液中的EDTA更能穩定。