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              發(fā)布時間:2021-07-14 09:52  

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              相對于弱酸性化合物而言,弱堿性化合物在陽離子交換固相萃取過程中99%的分解都是陽離子,這一弱堿性化合物所處的環(huán)境系統(tǒng)的 pH值必須低于其 pKa至少兩個 pH單位。洗脫時,環(huán)境體系的 pH值應(yīng)高于化合物的 pKa值至少兩個 pH單位,99%的化合物此時為中性狀態(tài),可通過適當(dāng)?shù)娜軇年栯x子交換柱中洗脫。

              選擇離子交換固相萃取柱的種類:為能有效地洗脫吸附在一起的離子化合物,對于含有強離子官能團(tuán)的目標(biāo)化合物,一般選用弱離子交換柱;對于含有弱離子官能團(tuán)的化合物,一般選用強離子交換柱。該方法可避免目標(biāo)化合物與吸附劑官能團(tuán)同時處于離子化狀態(tài),使目標(biāo)化合物始終保持在不能洗脫的保留狀態(tài)。

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              反相式C18分離柱

              C18是十八烷基碳鏈上的反相固定相的統(tǒng)稱。除以普通硅膠為基質(zhì)外,以C18鏈為基質(zhì)的高聚物小球、氧化鋁、氧化鋯等反相固定相,均可稱為C18鏈。有很多種類型的C18,常見的C18是硅膠基質(zhì),稱為 ODS,C18能夠在純水中工作,被稱為C18-AQ。

              C18反相柱的固定相為非極性固定相,流動相極性大于固定相極性,常用的溶劑一般為水和甲1醇、乙1腈、四氫呋1喃、異丙1醇等與水互溶的溶劑,適合分離非極性或弱極性的化合物,其洗脫順序一般為樣品極性從高到低。


              反相分離柱C18的適用范圍

              C18反相分離柱廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物的提取,藥1物合成研究與開發(fā),生物制藥等領(lǐng)域。若樣品極性偏大, Rf值非常接近,則不能分離正相模式;終產(chǎn)物要求純度98%以上,采用正相模式達(dá)不到;樣品在正相條件下存在溶解問題——不妨考慮采用反相C18模式分離。由于其填料粘合技術(shù)的成熟和良好的分離能力,C18柱已成為日常接觸分離提純研究人員zui多的反相柱。

              反相式C18反相分離柱的主要參數(shù)

              分離柱C18有多種參數(shù),大致可分為四個方面:相鍵(包括修飾、封端)、填充載體(硅膠純度、填充顆粒類型、粒徑、孔徑)、柱體本身(柱效、柱內(nèi)徑、柱長)和隱藏參數(shù)(比表面積、碳含量等)。小編想選擇以下幾個大家容易忽略的

              反向作用機制:

              反相萃取分離主要是利用固相萃取材料官能團(tuán)與目標(biāo)化合物碳?xì)滏I之間的非極性作用力。反相非極性的 SPE柱通常更適合從極性基質(zhì)中提取分離出非極性和中等極性的目標(biāo)化合物。

              對利用非極性作用力吸附于非極性 SPE柱的目標(biāo)化合物,可用氯1仿、環(huán)己1烷、乙1酸乙1酯等具有非極性的溶劑洗脫。當(dāng)溶劑的洗脫強度足夠大,可以使目標(biāo)化合物與吸附劑非極性基團(tuán)間的范德華力不受影響時,使其在 SPE柱中順利洗脫。即使是極性更強的甲1醇,對許多化合物而言,也有足夠的非極性力量來洗脫它。有時候,單種溶劑無法完全洗脫疏水性的目標(biāo)化合物,可以考慮使用二氯甲1烷:乙1酸乙1酯(1:1,體積比)。



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              洗滌劑和洗脫劑的優(yōu)選

              反相型和正相型洗脫液的洗脫強度應(yīng)分別增加和降低,但對回收率無明顯影響;

              就反相模式而言,可先對目標(biāo)化合物的水溶液上樣,然后以5%、10%、20%、30%、40%、50%、70%、80%、90%、的甲1醇水溶液進(jìn)行洗脫,分別收集洗脫液分析,建立淋洗曲線,確定目標(biāo)化合物被洗脫時的溶劑體系,淋洗液中甲1醇的含量應(yīng)略低于目標(biāo)化合物正好被洗脫時的溶劑體系,而洗脫液中甲1醇的含量應(yīng)略高于目標(biāo)化合物正好被完全洗脫時的溶劑體系;當(dāng)純甲1醇無法洗脫目標(biāo)化合物時,則應(yīng)測試甲1醇-甲1基叔丁基1醚混合溶液的洗脫曲線;如果離子型化合物既不溶于水也不溶于甲1醇,則可在溶劑體系中添加酸或堿。

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              凈水系統(tǒng)

              鍵合相位是非極性的,碰到水C18鏈就會被排斥,導(dǎo)致C18 “倒伏”,色譜峰變差,保留變?nèi)?,即水相位降,所以大多?shù)C18反相分離柱不能用純水作流動相。一般選用C18-AQ反相柱分離親水化合物,走水體系,提高保留值。

              防腐鹽

              單獨用酸或堿來調(diào)節(jié)流動相中的 PH值,由于分離成分的多樣性,未必能達(dá)到實驗所要求的效果。一般做法是:以緩沖鹽制備流動相。但是有些緩沖鹽會析出不易觀察的微晶:過濾后,改變流動相的組成;不過濾時,晶體會損壞管柱,也容易堵塞管道,污染檢測器。所以,在滿足實驗條件的情況下,盡量選擇不容易析出的緩沖鹽,分離結(jié)束后,一定要清洗柱子和整個分離系統(tǒng),避免出現(xiàn)色譜性霉菌。為便于制備和處理,常選用揮發(fā)性鹽類,如銨鹽等。




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