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等溫核酸試劑盒

RPA不受場地的限制，不需要昂貴儀器，對溫度要求低，恒溫擴增，時間短，可以在資源匱乏地區實現快速檢測的目的，目前已廣泛用于食品安全及動物疫病檢測，但國內就PRA技術在禽病病原檢測中的研究并不多。未來RPA技術可能在以下方面進一步突破：①研發專門引物設計軟件，降低引物設計難度。②反應溫度范圍拓寬，不局限于某一溫度，可在某溫度范圍內完成擴增反應。③實現多重檢測，結果判定更簡便直觀。④可擴增長片段核酸。⑤研發出低廉的酶制劑，降低成本。相信隨著技術不斷進步，勢會引起一場核酸檢測的革命，取代PCR技術在分子檢測中的霸主地位，在禽病病原的現場檢測中發揮更大的作用。

核酸試劑盒是如何工作的？

病毒的基因序列被設定為檢測靶點，通過對檢測樣本進行PCR擴增，因PCR反應模板僅為DNA，因此在進行PCR反應前，應將新型冠狀病毒核酸（RNA）逆轉錄為DNA，使靶點的DNA序列指數級增加，每一個擴增出來的DNA序列都可以于預先加入的熒光標記探針結合，產生熒光信號，擴增出來的靶點基因越多，累積的熒光信號就越強（就好比演唱會如果只有一個粉絲搖熒光棒很不顯眼，如果大家一起搖那就嗨了）。如果樣本中沒有該病毒，自然也就檢測不到熒光信號的增強了。

核酸試劑盒

核酸檢測試劑盒為什么會出現漏檢？

大家在新聞上看到過核酸檢測出現漏檢的現象，這是為什么呢？首先，我們對病毒認識不足，疾病進展目前都不清楚，這就可能導致采樣時間不合適，從而漏檢。第二，每個人的抵抗力不同，同樣都有了病毒，但有的人能快速地清除病毒，體內病毒量少，自然不易檢出。第三，試劑盒有自身的靈敏度限制，也就是說樣本中的病毒量少到一定程度，試劑盒是檢測不出來的，這是核酸檢測技術上的限制，另外，樣本采集是否規范、轉運保存是否恰當等因素都會影響試劑盒的陽性檢出率。

LAMP:環介導等溫擴增法的特征是針對目標DNA鏈上的六個區段設計四個不同的引物然后再利用鏈置換反應在一定溫度下進行反應。反應只需要把基因模板、引物、鏈置換型DNA合成酶、基質等共同置于一定溫度下(60~65℃)、經一個步驟即可完成。

重組酶與引物結合形成的蛋白-DNA復合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發生鏈交換反應形成并啟動 DNA合成，對模板上的目標區域進行指數式擴增。被替換的 DNA鏈與SSB結合，防止進一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件。