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發布時間：2020-12-24 17:35
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低溫生物菌種為什么可以在零下保藏？
低溫生物菌種都是需要保護劑的，動物細胞也可以。細菌結構問題使得它比較容易保存，只用加10%左右的甘油就可以在-20攝氏度保存。動物細胞需要加DMSO等，并且需要放到-80或者液氮才行冷凍保藏是指將菌種于-20℃以下的溫度保藏，通過冷凍，使微生物代謝活動停止。就是通過低溫來抑制微生物的生命活動，在保藏過程中，必須使微生物的代謝處于不活躍或相對靜止的狀態，才能在一定的時間內使其不發生變異而又保持生活能力。低溫、干燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素。
低溫生物菌種的液氮冷凍保藏法
(1)準備安瓿管用于液氮保藏的安瓿管，要求能耐受溫度突然變化而不致破碎，因此，需要采用硼硅酸鹽玻璃制造的安瓿管，安瓿管的大小通常使用75×10mm的，或能容1.2mm液體的。
(2)加保護劑與滅菌保存細菌、酵母菌或霉菌孢子等容易分散的細胞時，則將空安瓿管塞上棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃滅菌15分鐘:若作保存霉菌菌絲體用則需在安瓿管內預先加入保護劑如10%的甘油蒸餾水溶液或10%二甲亞砜蒸餾水溶液，加入量以能浸沒以后加入的菌落圓塊為限，而后再用1.05kg/cm2>，121.3℃滅菌15分鐘。
(3)接入菌種將菌種用10%的甘油蒸餾水溶液制成菌懸液，裝入已滅菌的安瓿管;霉菌菌絲體則可用滅菌打孔器，從平板內切取菌落圓塊，放入含有保護劑的安瓿管內，然后用火焰熔封。浸入水中檢查有無漏洞。
(4)凍結再將已封口的安瓿管以每分鐘下降1℃的慢速凍結至-30℃。若細胞急劇冷凍，則在細胞內會形成冰的結晶，因而降低存活率。
(5)保藏經凍結至-30℃的安瓿管立即放入液氮冷凍保藏器(圖Ⅶ-14)的小圓筒內，然后再將小圓筒放入液氮保藏器內。液氮保藏器內的氣相為-150℃，液態氮內為-196℃。
(6)恢復培養保藏的菌種需要用時，將安瓿管取出，立即放入38-40℃的水浴中進行急劇解凍，直到全部融化為止。再打開安瓿管，將內容物移入適宜的培養基上培養。
此法除適宜于一般微生物的保藏外，對一些用冷凍干燥法都難以保存的微生物如支原體、衣原體、氫細菌、難以形成孢子的霉菌、噬菌體及動物細胞均可長期保藏，而且性狀不變異。缺點是需要特殊設備。
低溫生物菌種的菌劑用法
微生物菌劑用量少，主要起調節作用。微生物菌劑的使用原則是“早，近，勻”使用時間早，離作物根系近，施用均勻。
⑴ 噴施 液體微生物菌劑含有固氮菌，光合細菌等微生物，可以用作葉面噴施，給植物增加營養，促進光合作用。我們公司的微生物菌劑不適合作葉面噴施，因為主要成分是多種芽孢菌復合而成的。
⑵ 拌種 將種子放入清水中浸濕后撈出控干，隨后將本品揚撒在種子上、混拌均勻，陰干后播種。使用種衣劑的種子應拌種衣劑，后拌本品，陰干后播種，隨拌隨播。這種方法適合各種糧食種子。能促進種子生長，減少病蟲害。
⑶ 浸種 菌劑：水以1：2的比例混合，攪拌后把種子放入菌液中，攪拌浸泡8—12小時，撈出陰干后播種。提高種子發芽率，增強抗病能力。
⑷ 蘸根 對于移栽作物，將本品兌適量水，蘸根后移栽即可。適用于有根的作物，在移栽時使用比較好。
⑸ 拌根 微生物菌劑可以和農家有機肥混合，有機肥必須先充分腐熟后才能使用，否則會殺掉菌劑中的微生物。當作種肥或底肥時，可將本品與化肥或有機肥拌在一起，隨肥料一起施用，須隨拌隨用，以免造成肥料融化而影響播肥質量。
低溫生物菌種純化方法
1、傾注平板法
首先把微生物懸液通過一系列稀釋，取一定量的稀釋液與熔化好的保持在40~50°左右的營養瓊脂培養基充分混合，然后把這混合液傾注到無菌的培養皿中，待凝固之后，把這平板倒置在恒箱中培養。單一細胞經過多次增殖后形成一個菌落，取單個菌落制成懸液，重復上述步驟數次，便可得到純培養物 2、涂布平板法
首先把微生物懸液通過適當的稀釋，取一定量的稀釋液放在無菌的已經凝固的營養瓊脂平板上，然后用無菌的玻璃刀把稀釋液均勻地涂布在培養基表面上，經恒溫培養便可以得到單個菌落。3、平板劃線法
簡單的分離微生物的方法是平板劃線法。用無菌的接種環取培養物少許在平板上進行劃線。劃線的方法很多，常見的比較容易出現單個菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、四格法等。當接種環在培養基表面上往后移動時，接種環上的菌液逐漸稀釋，然后在所劃的線上分散著單個細胞，經培養，每一個細胞長成一個菌落。
2、富集培養法
富集培養法的方法和原理非常簡單。我們可以創造一些條件只讓所需的微生物生長，在這些條件下，所需要的微生物能有效地與其他微生物進行競爭，在生長能力方面遠遠超過其他微生物。所創造的條件包括選擇合適的碳源、能源、溫度、光、pH、滲透壓和氫受體等。在相同的培養基和培養條件下，經過多次重復移種，然后富集的菌株很容易在固體培養基上長出單菌落。如果要分離一些專性寄生菌，就必須把樣品接種到相應敏感宿主細胞群體中，使其大量生長。通過多次重復移種便可以得到純的寄生菌。
