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              酶聯ELISA試劑盒報價服務至上 北京中檢維康有限公司

              發布時間:2021-07-29 16:43  

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              ELISA試劑盒的測試要求

              做好對照

              正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證實驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應。

              實驗條件的選擇

              在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:

              (1)固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。

              (2)包被(或抗原)的選擇:將(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時。蛋白質包被的適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml。

              (3)酶標記工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。

              (4)酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。



              Elisa試劑盒實驗原理

              將目標包被于微孔板中,制成固相載體,向微孔中分別加入標準品或標本,其中的目標連接于固相載體上的結合,然后加入微生物化的目標,將未結合的生物素洗凈后,加入HRP標記和親和素,再次徹底洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標呈正相關。在450nm波長下測定吸光度(O.D.值),計算樣品濃度。



              Elisa試劑盒操作步驟

              1、固相載體的挑選:許多物質可作為固相載體,如聚乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方式可所以凹孔平板、試管、珠粒等。

              2、包被或抗原的挑選:將或抗原吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。

              3、 酶標記作業濃度的挑選:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定。然后再固定其它條件或采取“方陣法',在正式試驗體系里準確地滴定其作業濃度。

              4、酶的底物及供氫體的挑選:對供氫體的挑選要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。



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