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PCR核酸檢測技術(shù)在新冠肺yan疫情檢測中發(fā)揮了重要作用，但由于該技術(shù)將待檢測核酸多次擴(kuò)增，所以非常小污染也容易導(dǎo)致假陽性結(jié)果。PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)中的污染不僅會影響實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量和結(jié)果，還會危害實(shí)驗(yàn)室工作人員的健康。

PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)完成，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)過程中易發(fā)生污染產(chǎn)生污染主要原因：

① 這也是常見的污染原因。重復(fù)擴(kuò)增后，PCR產(chǎn)物的黏貼遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過PCR的檢測限制，所以即使是少量的污染也足以造成假陽性結(jié)果。

② 試劑的污染。在試劑的配制過程中，接觸了污染的容器、移液器、槍頭、溶液等物導(dǎo)致試劑被污染。

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PCR實(shí)驗(yàn)室裝修

1、實(shí)驗(yàn)室墻壁、頂板和地板應(yīng)當(dāng)光滑、易清潔、防滲漏并耐化學(xué)品和消毒劑的腐蝕。地面應(yīng)防滑，不得在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)鋪設(shè)地毯和懸掛窗簾。實(shí)驗(yàn)室的墻體，包括頂棚，應(yīng)結(jié)構(gòu)牢固、氣密性好、所有陰角采用圓弧形線條過渡；墻體內(nèi)壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒；墻體和吊頂建議使用彩鋼板。

2、地面材料應(yīng)滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。

3、燈具要選用凈化燈具，能達(dá)到便于清洗、不積塵的特點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)應(yīng)急照明裝置，同時考慮合適的安裝位置，以保證人員安全離開實(shí)驗(yàn)室。

4、有可靠的電力供應(yīng)和應(yīng)急照明。每個房間必須裝有紫外線殺菌燈，殺菌燈的安裝高度在1.8～2.1m之間。

5、傳遞窗內(nèi)部安裝有紫外燈，供消毒用。

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PCR實(shí)驗(yàn)的污染來源都有哪些？

樣本間交叉污染：收集樣本的容器被污染或樣本密封不嚴(yán)導(dǎo)致外溢；不同樣本移液時忘記更換槍尖或未使用帶濾芯槍尖；移液器等實(shí)驗(yàn)器具及耗材未及時消毒滅菌；不同樣本同時開蓋或樣本劇烈震蕩、反復(fù)吹吸導(dǎo)致氣溶膠形成擴(kuò)散，相互交叉污染。

實(shí)驗(yàn)試劑污染：主要是在 PCR 組分試劑加樣過程中，由于移液器、容器、陰性對照及其它試劑被核酸模板或陽性對照污染。加樣過程中，因?yàn)镻CR試劑對溫度十分敏感，需要通過冰浴使得PCR試劑和PCR板/管處于0℃，但這個過程也充滿污染風(fēng)險。

擴(kuò)增產(chǎn)物污染：大量拷貝的產(chǎn)物泄漏或擴(kuò)增后的PCR反應(yīng)管意外開蓋，這是PCR反應(yīng)中主要、常見的污染問題。因?yàn)镻CR產(chǎn)物拷貝量大，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR檢測數(shù)個拷貝的極限，所以極微量的PCR產(chǎn)物污染，就可形成假陽性。