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第yi代腺病毒載體：一般將E1或E3基因缺失的腺病毒載體稱(chēng)為第yi代腺病毒載體，此類(lèi)型載體在未經(jīng)過(guò)純化時(shí)可引發(fā)機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的炎1癥反應(yīng)和免1疫反應(yīng)，純化后可以安全使用，體內(nèi)表達(dá)周期可達(dá)4周。

第二代腺病毒載體：E2A或E4基因缺失的腺病毒載體被稱(chēng)為第二代腺病毒載體，產(chǎn)生的免1疫反應(yīng)較弱其載體容量和安全性方面有所改進(jìn)，但病毒包裝難度和出毒和病毒滴度下降厲害，應(yīng)用相當(dāng)局限。

第三代腺病毒載體：第三代載體缺失了全部的（無(wú)病毒載體，gutless vector）或大部分腺病毒基因（微型腺病毒載體，mini Ad），僅可保留ITR和包裝信號(hào)序列。第三代腺病毒載體zui大可插入35kb的基因，病毒蛋白表達(dá)引起的細(xì)胞免1疫反應(yīng)進(jìn)一步減少，載體中引入核基質(zhì)附著區(qū)基因可使得外源基因保持長(zhǎng)期表達(dá)，并增加了載體的穩(wěn)定性。這一載體系統(tǒng)需要一個(gè)腺病毒突變體作為輔助病毒。

腺病毒表達(dá)

   腺病毒系統(tǒng)是很受歡迎的可以在任何哺乳動(dòng)物細(xì)胞中有效瞬時(shí)表達(dá)的基因遞送平臺(tái)。對(duì)于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，如原代或非分裂細(xì)胞，采用病毒遞送外源基因的方式是非常有效的選擇。鐘鼎生物采用293A腺病毒包裝細(xì)胞系（含有腺病毒包裝所必需的E1基因序列，是專(zhuān)為生產(chǎn)腺病毒和進(jìn)行滴度測(cè)定而建立的），用于高滴度的copy缺陷型（E1和E3缺失）腺病毒的生產(chǎn)，以進(jìn)行外源基因的表達(dá)。腺病毒感1染幾乎所有的細(xì)胞類(lèi)型，除了一些抗腺病毒感1染的淋巴1瘤細(xì)胞。腺病毒是研究原代非增殖細(xì)胞基因表達(dá)的zui佳系統(tǒng)，它可以使轉(zhuǎn)化細(xì)胞和原代細(xì)胞中得到的結(jié)果直接進(jìn)行對(duì)比；不整合到染色體中，無(wú)插入致突變性。能有效進(jìn)行增殖，滴度高：腺病毒系統(tǒng)可產(chǎn)生108 pfu/ml原液，濃縮后可達(dá)1010-1011 VP/ml，這一特點(diǎn)使它非常適用于基因cure。

位點(diǎn)特異性重組法

這類(lèi)方法使用來(lái)源于噬菌體的重組酶，這類(lèi)重組酶能夠識(shí)別特異性序列位點(diǎn)(長(zhǎng)度數(shù)十堿基對(duì)至數(shù)百堿基對(duì))并引發(fā)含有該位點(diǎn)的序列之間的重組；在腺病毒骨架和穿梭質(zhì)粒中添加重組酶能夠識(shí)別的特異性位點(diǎn)，在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)對(duì)應(yīng)的噬菌體重組酶或體外使用重組酶，介導(dǎo)骨架質(zhì)粒和穿梭質(zhì)粒之間的位點(diǎn)特異性重組，將目的基因引入骨架質(zhì)粒，形成帶有重組腺病毒基因組的腺病毒質(zhì)粒；轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞，進(jìn)行病毒載體拯救。該方法進(jìn)一步簡(jiǎn)化了腺病毒質(zhì)粒的制備過(guò)程，它的缺限是在腺病毒基因組的某些部位不可避免的殘留了重組酶特異性識(shí)別位點(diǎn)。