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廣州碩譜生物科技有限公司NH2固相萃取柱選擇

溶劑環(huán)境的pH怎么影響化合物在小柱上的保留，為什么我們要關(guān)注化合物的pKa值，在C18小柱中需要考慮這些因素嗎？

我們來說一下，Ka指的是酸度系數(shù)，又名酸離解常數(shù)，可以理解為酸離解H離子的能力，而pKa=-lgKa，對(duì)于酸，在環(huán)境pH下存在如下平衡：左邊的A-/HA，實(shí)際是指溶劑環(huán)境下，離子態(tài)和分子態(tài)的比例，右邊反映了左側(cè)兩者的轉(zhuǎn)化關(guān)系，取決于（pH-pKa)的數(shù)值大小。必須保證選擇的樣品溶劑不能將目標(biāo)物洗脫，選擇的淋洗液應(yīng)在不洗脫目標(biāo)物的前提下zui大限度地洗脫干擾物，所以洗脫液應(yīng)能恰好完全洗脫目標(biāo)物。對(duì)于離子交換小柱，保持目標(biāo)物的離子化而非分子態(tài)，是一個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)，這對(duì)于離子交換作用機(jī)理的交換柱，將直接關(guān)系到其實(shí)驗(yàn)成敗。而對(duì)于硅膠鍵合C18小柱的萃取，由于硅膠（—SiOH）不能完全“封端”，在pH大于4.0的情況下，硅膠都會(huì)帶上負(fù)電荷，因而會(huì)使得能電離的化合物與硅膠作用，增強(qiáng)了這種附帶的次級(jí)作用理（主作用力為非極性相互作用力），而使得此類物質(zhì)在硅膠-C18上的保留增強(qiáng)，若只考慮C18的非極性作用力，必然會(huì)導(dǎo)致回收結(jié)果的不盡人意。

固相萃取（Solid Phase Extraction，簡(jiǎn)稱SPE）,也稱固相提取，是一項(xiàng)結(jié)合了選擇性保留、選擇性洗脫等過程的分離技術(shù)。通常因?yàn)榉聪噍腿∮糜诨衔锏念A(yù)處理，正如反相萃取在色譜中是一種常見的分離方法，反相萃取中的淋洗液通常是一種水相或含水的緩沖溶液，除去水分，從而便于后續(xù)的干燥、濃縮步驟。 SPE也是一個(gè)柱色譜分離過程，分離機(jī)理、固定相和溶劑的選擇等方面與高1效液相色譜（HPLC）有許多相似之處。

植物油中9種抗1氧化劑檢測(cè)——SPE法

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

分別稱取沒食子酸丙酯（PG），叔丁基對(duì)苯1二酚（TBHQ），去甲二氫愈木創(chuàng)酸（NDGA），叔丁基對(duì)羧基茴香醚（BHA），2,6-二叔丁基-4-羧甲1基苯1酚（Ionox-100），沒食子酸辛酯（OG），2,6-二叔丁基對(duì)甲1基苯1酚（BHT），沒食子酸十二酯（DG）10mg 定容到 10mL，得 1000μg/mL的單標(biāo)

稱取 2,4,5-三羧基苯丁1酮（THBP）1mg，定容到 10mL，得單標(biāo) 100μg/mL。

提取步驟

精密稱取 1g 樣品于 50mL 離心管中，加入 10mL 乙1腈，渦旋 2min，超聲 10min，3000r / min 離心 5min，收集上清液于離心管中，再重復(fù)使用 10mL 乙1腈溶液提取 1 次，合并 2 次上清液，待凈化。

水產(chǎn)品中苯并(a)芘的測(cè)定反相高1效液相色譜法

方法特點(diǎn)

● 方法簡(jiǎn)單快速，不需要進(jìn)行復(fù)雜的活度調(diào)節(jié)和活性測(cè)試，整個(gè)操作時(shí)間不超過1h。● 耗費(fèi)溶劑少,僅為GB 5009.27—2011的1/3。● 去油效果佳，能有效去除油酯等干擾。● 有較高的回收率和穩(wěn)定性。● 適用于熏烤水產(chǎn)品等肉、魚及其制品的檢測(cè)。

樣品前處理在儀器分析過程中是一個(gè)既耗時(shí)又極易引進(jìn)誤差的步驟，樣品處理的好壞直接影響色譜分析的結(jié)果，固相萃取小柱又是一種用途廣泛而且越來越受歡迎的樣品前處理技術(shù)，因此，為了提高分析測(cè)定效率，使用好固相萃取小柱是非常有必要

正相機(jī)制：

在許多固相萃取材料的極性表面和樣品中目標(biāo)化合物的極性官能團(tuán)之間會(huì)產(chǎn)生極性力。通常使用極性力的吸附劑在色譜中被稱為正相色譜吸附劑。極性力強(qiáng)度大于非極性力，但小于離子力強(qiáng)度；常用的極性基團(tuán)有羥基、胺基、巰基等。

由于非極性溶劑不能與極性固定相材料形成具有氫鍵的官能團(tuán)，因此非極性基質(zhì)環(huán)境對(duì)吸附劑和目標(biāo)化合物之間的極性作用力是有利的。C18填料是十八烷1基硅1烷鍵合硅膠，pH值超出酸性范圍時(shí)，鍵合相十八烷1基易發(fā)生水解而流失。結(jié)果表明，在極性作用下，樣品的固相萃取過程中，基質(zhì)主要是非極性的，如正己烷、二氯甲1烷、菜油等，而目標(biāo)化合物多含有極性較大的官能團(tuán)。

對(duì)SPE柱進(jìn)行合理的處理

在 SPE柱中，吸附劑可能存在少量干擾物，有效活化可避免干擾物進(jìn)入洗脫液中，活化溶液應(yīng)選擇整個(gè)洗脫過程中洗脫強(qiáng)度zui高的溶劑體系；在反相模式下，從樣品溶液到洗脫液的過程主要涉及到0%-100%甲1醇水溶液，因此應(yīng)選擇純甲1醇活化溶液，而在目標(biāo)化合物需要用甲1醇-甲ji叔丁基醚混合液洗脫時(shí)，則應(yīng)選擇純甲ji叔丁基醚溶液；在正相模式下，從樣品溶液到洗脫液的過程主要涉及到0%-100%正己烷-甲ji叔丁基醚溶液的過程，因此活化溶液應(yīng)選擇純甲ji叔丁基醚溶液。廣州碩譜生物科技有限公司NH2固相萃取柱選擇為什么反相填料C18使用時(shí)建議溶液的PH范圍是2-8。

色譜柱技術(shù)的差距在哪里？

答：色譜柱技術(shù)包括填料技術(shù)和裝柱技術(shù)，填料技術(shù)自不待言，填料的好壞對(duì)色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響。因?yàn)镃8的碳鏈較短，不能覆蓋硅膠的表面，其極性作用力比C18要強(qiáng)。裝柱技術(shù)也沒有想象中的這么簡(jiǎn)單，不同固定相、不同粒徑、不同柱管內(nèi)徑和長(zhǎng)度，裝柱工藝都有所不同，要裝出緊密、穩(wěn)定、均一的柱床，更多是一門藝術(shù)，需要經(jīng)驗(yàn)積累。

國(guó)內(nèi)和國(guó)外想比，我認(rèn)為色譜柱的差距在于：國(guó)內(nèi)公司以前都不會(huì)自己開發(fā)填料，一般買國(guó)外現(xiàn)成填料裝柱，買到的填料質(zhì)量控制權(quán)不在自己手里。結(jié)果表明，在極性作用下，樣品的固相萃取過程中，基質(zhì)主要是非極性的，如正己烷、二氯甲1烷、菜油等，而目標(biāo)化合物多含有極性較大的官能團(tuán)。另外因?yàn)檠b柱歷史短，經(jīng)驗(yàn)積累少，裝柱工藝也沒有完全達(dá)到國(guó)外水平。另外，對(duì)色譜柱性能很關(guān)鍵的基礎(chǔ)材料-----裸硅膠，國(guó)產(chǎn)的還不過關(guān)，在純度、粒徑和孔徑的均一性方面和國(guó)外產(chǎn)品相比，差距很大。