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發(fā)布時(shí)間：2021-01-10 07:53
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ELISA試劑盒的制備方法
包括以下步驟：
1)抗原表位的計(jì)算機(jī)篩選；
2)抗原的制備；
3)采集；
4)間接ELISA方法的建立；
5)間接ELISA方法的敏感性和特異性驗(yàn)證；
6)試劑盒的穩(wěn)定性驗(yàn)證；
7)對屠宰場進(jìn)行臨床檢測。該方法簡單、快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性合格、重復(fù)性好。應(yīng)用本發(fā)明制得的試劑盒能有效檢出戊型病毒，適用于大批量發(fā)病樣本的檢測，可用于豬戊肝的快速診斷，并預(yù)防、控制豬戊病毒的流行和阻斷戊病毒由豬向人傳播。
ELISA試劑盒的成分
1 預(yù)包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 96T
2 酶標(biāo)記抗體: (30倍濃縮)HRP標(biāo)記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 0.4mL x 1
3 標(biāo)準(zhǔn)品: 重組小鼠白介素-6 0.5mL x 2
4 緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 1
5 標(biāo)記抗體稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 1
6 顯色劑: TMB底物液 15mL x 1
7 終止液: 1N硫酸 12mL x 1
8 濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1 操作說明 1實(shí)驗(yàn)所需器材(但試劑盒沒有提供) (450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及燒杯 去離子水 冰箱(4°C) 坐標(biāo)紙(log/log) 吸水紙 試管(用于標(biāo)準(zhǔn)品稀釋) 溫育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性試劑管(用于濃縮酶標(biāo)記抗體和顯色劑)
ELISA試劑盒的安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2． 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
4． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
5． 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
6． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
7． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
8． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
9． 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
10． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
11． 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
12． 按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
ELISA試劑盒——會(huì)出現(xiàn)的問題及解決辦法
標(biāo)準(zhǔn)曲線線性不佳，或是平行性不好。
a.原因：溫育位置避光不好或受到氣流干擾。
解決辦法： 請確認(rèn)溫育位置既不透光也不透風(fēng)(如抽屜內(nèi))。
b.原因：操作時(shí)間拖太久。
解決辦法：請?jiān)诜椒ㄊ炀毢笤龠M(jìn)行操作。
c.原因：微孔間相互污染。
解決辦法： 加樣品時(shí)，請小心勿濺出微孔外，以免造成其它微孔的污染。
d.原因：標(biāo)準(zhǔn)品或酶標(biāo)記物所加入的量不一致。
解決辦法：請使用已校正過的移液槍，并確保其與吸頭之間有高度密合性。
e.原因：添加樣品或試劑的操作方法不正確。
解決辦法：加樣品或試劑時(shí)，吸頭請勿接觸微孔。
f.原因：洗板過程發(fā)生問題(如管路堵塞、洗完板后未立刻進(jìn)行下一步驟)。
解決辦法：請隨時(shí)監(jiān)控洗板過程，洗完后立即進(jìn)行下一步驟。
