流式細胞技術詢問報價【英瀚斯】

Cell Counting Kit-8（簡稱CCK-8）是一種基于WST-8的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的檢測試劑。WST-8【化學名：2-(2-甲氧ji-4-硝ji苯ji)-3-(4-硝ji苯ji)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，是一種類似于MTT的化合物，它在電子載體1-甲氧ji-5-甲ji吩嗪鎓硫酸二jia酯（1-Methoxy PMS）存在的情況下，被線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的橙黃色甲瓚產物（formazan）。細胞增殖越多越快，顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺，對于同樣的細胞，顏色的深淺與活xi胞的數量成正比，因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。3x106細胞懸浮于15mlMEF生長培養基中，接種到200ml培養瓶中。

透射電鏡自噬小體檢測

胰酶消化，收集作用后的細胞，離心，先將細胞塊固定在2.5%成二醛和0.1%的PBS溶液中保存在4C中過夜。

再用乙醇梯度脫水，接下來用環氧樹脂浸透并切成薄片。隨后超薄切片用銅網固定，后用重金屬醋酸雙氧鈾和檸檬酸鉛染色。通過TEM分析凋亡細胞內超微結構變化，拍照保存。

貼壁細胞:先倒出培養液，采用胰蛋白酶消化或者用細胞刮(會產生碎屑)刮下:帶培養液進行離心，100-1500/mim 5 10min。離心完畢倒出培養液。25克胰酶蛋白酶(活力為1:250)，加入100ml無Ca2 、Mg2 的Hank's液溶解，濾器過濾chu菌，4°C保存,用前可在379C下回溫。管底的細胞團不要打散， 沿管壁倒入適量(一般為材料體積的5-10倍)的2.5-3.5%成醒固定液，固定約1h-2h. 也可在4C冰箱過夜。

小鼠成骨細胞和破骨細胞共培養模型的建立

細胞之間的相互調控作用奠定基礎.方法利用24 h內新生小鼠顱骨和4~8周齡成年小鼠四肢長分別分離、培養成骨細胞和破骨細胞，采用間接接觸的培養模式將接種了骨sui單核細胞的玻片或骨片置入提前24 h接種了成骨細胞的培養皿中進行共培養.共培養-定時間后進行破 骨細胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP染色鑒定和骨吸收功能檢測，并進一 步采用RT- PCR對破骨細胞標志酶基因基質金屬蛋白酶.9(MMP-9)、TRAP 和組織蛋白酶K (Cathepsin K )的表達進行檢測結果共培養5天后可觀TRAP( )多核細胞形成13天TRAP( )多核細胞數目達到高峰;骨吸收陷窩在共培養7天后開始出現,隨著培養時間的延長,陷窩面積呈增加趨勢;破骨細胞標志基因TRAP在共培養3天時開始表達，而MMP-9和Cathepsin K則在共培養5天后表達結論共培養體系中成骨細胞對破骨細胞調控作用顯著誘導的破骨細胞具有噬骨能力，該共培養模型可用于成骨細胞和破骨細胞之間的相互調控作用研究.