人環(huán)磷酸腺苷 cGMP ELISA高性價比的選擇【武漢紐斯特】

對于生長的組織培養(yǎng)液中的細(xì)胞，首先移除培養(yǎng)基，然后加入0.1M HCl處理細(xì)胞。孵育10分鐘并觀察細(xì)胞是否被裂解；如果裂解不充分，接著孵育10分鐘并觀察。以大于600g離心力于室溫離心，收集上清直接用于實驗。臨用前在0.1M HCl中加入0.1%至1%濃度的Triton-x 100可增強(qiáng)細(xì)胞和組織裂解。在這個濃度范圍內(nèi)，去污劑并不干擾試驗的結(jié)合部位，但是會適度的增加光密度值。含有Triton的樣品需利用標(biāo)準(zhǔn)曲線估計濃度，為了較精l確的測定，標(biāo)準(zhǔn)曲線需以相同方式稀釋。取1 mL細(xì)胞培養(yǎng)上清加入10μL濃鹽酸，600g離心力于室溫離心，上清液直接用于實驗測定分析。

靈敏度

通過比較10個B0孔平均光密度值(OD)和10個5號管標(biāo)準(zhǔn)品的平均光密度值，計算出靈敏度。cAMP濃度的檢測極限通過標(biāo)準(zhǔn)曲線上0位置的兩個標(biāo)準(zhǔn)偏差來測定。

OD(B0平均數(shù)) =0.685± 0.003

OD（5號 標(biāo)準(zhǔn)品平均數(shù)）=0.604± 0.010

光密度偏差(0-0.4 pmol/mL) =0.081

2 SD's of the Zero Standard =0.006

靈敏度 =081.0006.0/0.8×0.4 pmol/mL =29.6 fmol/mL

Ras活性分析。純化的Ras蛋白分別用GDP (Lane 1)和GTPγS (Lane 2)進(jìn)行活化。然后用特異性識別Ras活性構(gòu)象的鼠單克l隆抗l體(Cat. # 26909)孵育?；钚訰as珠子顆粒用特異性識別Ras活性構(gòu)象的兔多克l隆抗l體(Cat # 21021)進(jìn)行免l疫印跡實驗。圖展示的是Ras-GDP和Ras-GTPγS的Western blot實驗結(jié)果。