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發布時間：2021-07-30 09:29
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備型柱子柱壓上升，柱效下降，怎么辦？
對高的價值的制備柱來講，延長柱子壽命是很重要的。一般要注意保護柱子，一般來說，制備柱子一般需要保護柱配套。
下面是可能堵塞柱子的原因：
（1）如果您所分離的樣品中雜質較多而您在上樣前沒有經過過濾（0.45微米），一些顆粒性雜質會積聚在柱頭造成柱壓升高。
（2）也有可能是因為您所使用的流動向中含有緩沖鹽的原因，結晶或發生化學變化而堵塞。可以把柱子沖一沖。
（3）流動相是否符合液相色譜的要求？是否過濾處理？
反相色譜分離純化后，怎樣除去流動相產品中的TFA和乙腈或其他雜質？
TFA是反相色譜分離中常用的添加劑。可以用凍干的辦法去除，國外許多文獻是這樣報道的。還可以試試離子交換、凝膠層析、甚至透析和超濾，其中，離子交換層析效果比較好，還可以起到濃縮樣品的作用。
首先，凍干的辦法應該可以幾乎完全地除去TFA和乙腈，藥品實驗前盡量先檢測一下凍干品中的殘留量，只要不超過允許范圍，這種辦法是很簡單、有效的。
其次，如果你的藥品的分裝量不大的話(<100ug)，建議你用離子交換層析，盡量裝一個小一點兒的柱子，讓含鹽洗脫峰的蛋白濃度達10mg/mL以上，稀釋后完全符合試驗要求。如果用分子篩，考慮稀釋，盡量也先過一個離子交換。此外可以試試疏水層析。如果產品是堿的話，可能會形成TFA鹽，這樣通過上述方法就無法除去。一般可以用堿水洗，然后將產品萃取出來。或者在里面加入一定量的鹽酸，再干燥后形成鹽酸鹽。
同一種填料的分析柱、制備柱按線形放大公式套，分離度會不會變化？
一般會有一定的變化，原因有以下幾點：
（1）制備柱的裝填是否均勻，如不均勻則可能產生渦流擴散使各個組分的經過通道的直徑不同、阻力不一樣，停留時間不同，色譜峰可能變寬。
（2）如果樣品在流動相中溶解度小，在制備色譜上會有不同的峰展寬。
（3）如果樣品在分析柱上有展寬或拖尾的現象，放大到制備柱上后峰的展寬和拖尾經常會非常嚴重，導致分離失敗。
制備色譜柱如何測柱效？
可以選擇幾種物質，苯，萘、蒽等的衍生物上柱，流動相一般用65-80%的甲醇/水，測定后根據保留時間計算塔板數。由于制備色譜的管路死體積一般比較大，很難得到和供應商相同的柱效。建議在制備柱開始使用時在自己的色譜上測一下柱效，然后定期檢測柱效進行以進行比較。
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