RNA上樣Buffer詢問報價「友名生物」

小分子類物質(zhì)包含多肽、天然小分子、化學(xué)合成小分子等一系列的物質(zhì)，被廣泛用于medicine等各個領(lǐng)域。以往小分子的定量檢測主要通過氣相和液相色譜完成，存在周期長，檢測儀器價格昂貴等多方面的不足。那么immune檢測技術(shù)可以用于定量檢測小分子嗎？

免1疫檢測試劑盒的技術(shù)基礎(chǔ)就是抗原和抗1體的特異性結(jié)合，小分子特異性抗1體的制備即是小分子immune檢測試劑盒制備的關(guān)鍵之處。小分子由于分子量小，結(jié)構(gòu)簡單，在免1疫學(xué)上劃歸為半抗原（Hapten），即只有immune反應(yīng)性而沒有immune原性的一類物質(zhì)，不能直接刺激機體產(chǎn)生antibody但是卻擁有和antibody結(jié)合的特性。隨著抗1體制備技術(shù)的發(fā)展，小分子特異性抗1體的制備技術(shù)顯得更為多元化

轉(zhuǎn)移RNA

轉(zhuǎn)移RNA（tRNA）在蛋白質(zhì)合成過程中負責(zé)轉(zhuǎn)運氨基酸、解讀mRNA遺傳密碼。tRNA占細胞總RNA的10%~15%，絕大多數(shù)位于細胞質(zhì)中。tRNA由Crick于1955年提出其存在，Zamecnik和 Hoagland于1957年鑒定。

tRNA一級結(jié)構(gòu)具有以下特點：

①是一類單鏈小分子RNA，長73~95nt（共有序列76nt），沉降系數(shù)4S。

②是含稀有堿基zui多的RNA，含7-15個稀有堿基（占全部堿基的15%~20%），位于非配對區(qū)。

③5′末端堿基往往是鳥piao呤。

④3'端是CCA序列，其中的腺苷酸常稱為A76，其3’—OH是氨基酸結(jié)合位點。

PCR產(chǎn)物的回收（膠回收試劑盒）

1.膠回收的目的（1）去除非特異性擴增的產(chǎn)物（2）去除多余的底物（3）去除多余的Taq酶（4）得到目的片段

2.膠回收的過程（1）切膠：紫外下切膠，稱重。之后用槍頭將膠塊搗碎。切膠的刀片建議選用一次性刀片，實驗臺等也盡可能用乙醇擦拭干凈。可通過空EP管與裝膠EP管質(zhì)量的差值計算膠的質(zhì)量。注意切膠時盡可能避免切到條帶外的凝膠，且避免紫外時間過長。別忘記膠條有厚度，前后多余的部分也盡量切除。（2）溶膠：每1 mg膠加入1 μL膜結(jié)合液（MB），按比例1:1加入MB，55℃水浴溶解。每1~2 min震蕩混勻，待溶解后至少在水浴中保持1~2 min，保證膠塊完全溶解。在電泳過程中，DNA會與大分子的多糖緊密結(jié)合，凝膠的種類和質(zhì)量不同，DNA與之結(jié)合力也不同，只有凝膠充分溶解DNA才能充分釋放。否則，凝膠將與DNA一起沉淀下來，洗脫后將影響回收結(jié)果的純度。（3）結(jié)合：將溶膠轉(zhuǎn)移至純化柱內(nèi)，12000 rpm離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將純化柱重新插回收集管中。膠塊完全溶解后建議將膠液溫度降至室溫再上柱，因為純化柱在溫度較高時結(jié)合DNA的能力較弱。

用乙醇沉淀DNA時為什么一定要加NaAc或NaCl

　　在pH為8左右的溶液中，DNA分子是帶負電荷的，加一定濃度的NaAc或NaCl，使Na 中和DNA分子上的負電荷， 減少DNA分子之間的同性電荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA鈉鹽沉淀，當加入的鹽溶液濃度太低時， 只有部分DNA形成DNA鈉鹽而聚合，這樣就造成DNA沉淀不完全，當加入的鹽溶液濃度太高時， 其效果也不好。在沉淀的DNA中，由于過多的鹽雜質(zhì)存在，影響DNA的酶切等反應(yīng)，必須要進行洗滌或重沉淀。

　　加核糖核酸酶降解核糖核酸后，為什么再要用SDS與KAc來處理?

　　加進去的RNase本身是一種蛋白質(zhì)，為了純化DNA，又必須去除之，加SDS可使它們成為SDS-蛋白復(fù)合物沉淀，再加KAc使這些復(fù)合物轉(zhuǎn)變?yōu)槿芙舛雀〉拟淃}形式的SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物，使沉淀更加完全。也可用飽和酚、*抽提再沉淀，去除RNase。在溶液中，有人以KAc代替NaAc，也可以收到較好效果。

　　在基因操作實驗中，磷酸鹽緩沖系統(tǒng)(pKa=7.2)和硼酸系統(tǒng)(pKa=9.24)等雖然也都符合細胞內(nèi)環(huán)境的生理范圍(pH)，可作DNA的保存液，但在轉(zhuǎn)化實驗時，磷酸根離子的種類及數(shù)量將與Ca2 產(chǎn)生Ca3(PO4)2沉淀，在DNA反應(yīng)時，不同的酶對輔助因子的種類及數(shù)量要求不同，有的要求高離子濃度，有的則要求低鹽濃度，采用Tris-HCl(pKa=8.0)的緩沖系統(tǒng)，由于緩沖液是TrisH /Tris，不存在金屬離子的干擾作用，故在提取或保存DNA時，大都采用Tris-HCl系統(tǒng)，而TE緩沖液中的EDTA更能穩(wěn)定。