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              植物轉基因載體值得信賴「在線咨詢」

              發布時間:2021-10-13 02:52  

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              科學家在培養轉0基因植物時,常用什么中的質粒作為載體?

              (1)具有較小的分子量。經驗表明,為了避免在DNA的純化過程中發生鏈的斷裂,克1隆載體的分子大小建議不要超過10Kb。pBR質粒這種小分子量的特點,不僅易于自身DNA的純化,而且可容納較大的外源DNA部分片段;

              (2)具有兩種抗1菌素抗性基因可供作轉化子的選擇記號,能指示載體或重組DNA分子是否進入宿主細胞以及外源DNA分子是否插入載體分子形成了重組子。標記基因往往可以賦予宿主細胞一種新的表型,這種轉化細胞可明顯地區別于非轉化細胞。當我們把一個DNA部分片段插入到某一個標記基因內時,該基因就失去了相應的功能。當把這種重組DNA分子轉到宿主細胞后,該基因原來賦予的表型也就消失了。要是仍保留了原來表型的轉化細胞,細胞內含有的DNA分子一定不是重組子。很顯然,既要指示外源DNA是否進入了宿主細胞,又要指示載體DNA分子中是否插入了外源DNA部分片段,那么這種載體必須至少具有兩個標記基因。另外,pBR質粒載體還具較高的拷貝數,而且經過氯霉1素擴增之后,每個細胞中可積累1000~3000個拷貝,這就為重組體DNA的制備提供了極大的方便。



              腺病毒的基因組

              腺病毒的基因組以線性的雙鏈DNA形式存在,由蛋白VII和一種稱為mu的小蛋白緊密地環繞在其周圍,起到類組蛋白樣的作用。另一種蛋白V將這種DNA-蛋白復合物連接起來,并通過蛋白VI與病毒衣殼連接在一起。在兩條鏈的5′端各以共價鍵結合著一個被稱為DNA末端蛋白(pTP)復合物(DNA-TPC)的特化的結構,與腺病毒copy密切相關。腺病毒基因組的兩端各有一段100bp的反向末端重復序列(ITR),是copy的起始位點。在左端ITR的3′側有一段長約300bp的包裝信號(ψ)介導腺病毒基因組包裝入病毒衣殼。對腺病毒而言,只有包括兩端的ITR和包裝信號(ψ)的約0.5kb的序列是順式作用元件,也就是說必須由腺病毒載體自身攜帶,而其他的30余種蛋白都可以通過輔助病毒(或細胞)反式補足。



              基因導入細胞常用方法

              轉染

                重組的噬菌體DNA也可象質粒DNA的方式進入宿主菌,即宿主菌先經過CaCl2,電穿孔等處理成感受態細菌再接受DNA,進入感受態細菌的噬菌體DNA可以同樣copy和繁殖,這種方式稱為轉染(transfection)。M13噬菌體DNA導入大腸桿1菌就常用轉染的方法。重組DNA進入宿主細胞也常用轉染方式。zui經典的是1973年建立的磷酸鈣法,其利用的基本現象是:DNA如以磷酸鈣-DNA共沉淀物形式出現時,培養細胞攝取DNA的效率會顯著提高。用電穿孔法處理培養的哺乳類細胞也能提高細胞攝取DNA能力,但所用外加電場的強度、電脈沖的長度等條件與處理細菌者都很不相同。用人工脂質膜包裹DNA,形成的脂質體可以通過與細胞膜融合而將DNA導入細胞,方法簡單而有效,但缺點是有細胞毒性和血1清的不親和性,近年來人們發現了一種更為有效的轉染試劑-陽離子聚合物,其克服了脂質體轉染試劑細胞毒性大,在體內易被血1清清除等缺點,具有轉染效率1高,操作簡單而日益受到重視。



              20世紀50年代以后,隨著分子遺傳學的發展,尤其是沃森和克里克提出DNA雙螺旋結構以后,人們進一步認識了基因的本質,即基因是具有遺傳效應的DNA。研究結果還表明,每條染色體只含有1~2個DNA分子,每個DNA分子上有多個基因,每個基因含有成百上千個脫氧核苷酸。自從RNA病毒發現之后,基因的存在方式不僅僅只存在于DNA上,還存在于RNA上。由于不同基因的脫氧核糖核苷酸的排列順序(堿基序列)不同,因此,不同的基因就含有不同的遺傳信息。1994年中科院曾邦哲提出系統遺傳學概念與原理,探討貓之為貓、虎之為虎的基因邏輯與語言,提出基因之間相互關系與基因組邏輯結構及其程序化表達的發生研究。



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