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發布時間：2021-08-28 04:37
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動物組織細胞基因組DNA提取
操作步驟
1. 取新鮮或冰凍動物組織塊0.1g（0.5cm3），盡量剪碎。置于玻璃勻漿器中，加入1ml的細胞裂解緩沖液勻漿至不見組織塊，轉入1.5ml 離心管中，加入蛋白酶K
（500ug/ml）20μl，混勻。在65℃恒溫水浴鍋中水浴30min，也可轉入37℃水浴12～24h，間歇振蕩離心管數次。于臺式離心機以12000 rpm離心5min，取上清液入另
一離心管中。
2.加2倍體積異，倒轉混勻后，可以看見絲狀物，用100ul 吸頭挑出，涼干，用200ul TE 重新溶解。（可進行PCR反應等，需要進一步純化的按下列步驟進行）
3.加等量的酚??振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。
4.取上層溶液至另一管，加入等體積的?，振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。
5. 取上層溶液至另一管，加入1/2體積的7.5mol/L氨加入2倍體積的無水乙醇，混勻后室溫沉淀2min ，離心12000 rpm ,10min。
6.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉。
7.用1ml 70%乙醇洗滌沉淀物1次，離心12000 rpm ， 5min。
8.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉，室溫干燥。
9.加200ul TE重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?C20℃保存備用。
10.吸取適量樣品于GeneQuant上檢測濃度和純度。
線粒體測序
線粒體是真核生物的重要細胞器，是生物體的能量工廠，參與能量代謝、信號轉導、細胞凋亡等許多生命活動，對生物的生理活動起著至關重要的作用。大部分線粒體基因由于其母系遺傳特性以及進化速率較快等特點，被廣泛地用于種群遺傳學、進化生物學、譜系地理學和系統發育學、疾病診斷等學科領域。蛋白質互作驗證服務在后基因組時代，基因的表達產物蛋白質作為生物功能直接的執行者和體現者，在生物集體的生理及病理中扮演著重要的角色。線粒體全基因組在生物進化的研究中具有的優勢。由于線粒體有著與真核生物長期共生的進化歷史，因此其基因組包含了反映物種進化的關鍵信息，同時，相對于核基因組，線粒體基因組小，容易對大量物種進行橫向的比較分析，有利于生物進化的研究，因而受到進化生物學家的鐘愛。線粒體的組成可以從兩個層面上反映物種及群體的遺傳和進化，即核酸序列組成和基因組的結構特征，兩者的特征具有不同的進化機制和進化速度，在進化生物學研究中可以很好的互補。
RNA pull down 檢測
RNA pull down：RNA沉淀檢測，是檢測RNA結合蛋白與其靶RNA之間相互作用的主要實驗方法之一。使用體外轉錄將RNA進行生物素標記，并與細胞蛋白裂解液孵育，形成RNA-蛋白復合物。目前公司可為您提供反轉錄PCR、熒光定量PCR、凝膠電泳遷移率等檢測服務，大大縮短您的實驗周期、降低您的實驗成本。復合物通過磁珠結合后分離，復合物純化洗脫后通過Western blot驗證檢測特性的蛋白。若篩選可能結合的蛋白通過質譜實驗進行檢測篩選。
單細胞測序（英語：Single cell sequencing）采取優化的下一代DNA測序技術（NGS）檢測單細胞的序列，可以獲得特定微環境下的細胞序列差異以方便研究其功能差異等。對個體細胞的DNA測序可以幫助我們了解例如在中的小范圍細胞的變異；對其進行RNA測序可以幫助我們了解和鑒別不同的細胞類型與其表現的基因，對研究發育生物學等有較大裨益。通過識別個體基因組在特定位點的特定序列重復，即可創建其基因檔案。
分離單細胞
在全基因組擴增和測序前，有很多方法可以分離細胞個體，其中流式細胞術（FACS）較為常用。個體細胞可以用顯微操作來收集，這樣較為快捷而且成本較低，但是比較有技術難度，而且顯微鏡下對細胞的錯誤分類容易影響實驗結果。激光捕獲顯微切割技術（LCM）亦可以用來收集單細胞。實驗流程：細胞固定-細胞膜破膜-蛋白封閉-目的蛋白結合-熒光二抗結合-DAPI染色-熒光顯微鏡拍照或激光共聚焦顯微鏡拍照。但是盡管激光捕獲顯微切割可以保留樣本細胞在組織中的空間位置，但是捕獲單細胞的時候容易連帶周圍細胞的物質。高通量的細胞個體分離還可以使用微流控技術。微流控技術和流式細胞技術都能準確而自動地分離無偏樣本。但是，兩種方法都要求首先將細胞從其為環境中脫離，因此可能在RNA表達分析中造成對轉錄數據的干擾。
