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發(fā)布時間：2021-01-11 16:46
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表面活性劑是指加入少量能使其溶液體系的界面狀態(tài)發(fā)生明顯變化的物質(zhì)，具有固定的親水親油基團，在溶液的表面能定向排列。表面活性劑的應用可分為民用和工業(yè)應用。民用表面活性劑中有2/3用于個人保護用品，工業(yè)用表面活性劑是民用表面活性劑以外用于各工業(yè)領域的表面活性劑總和。表面活性劑的分子結(jié)構具有兩親性：一端為親水基團，另一端為疏水基團；親水基團常為極性基團，如羧酸、磺酸、硫酸、氨基或胺基及其鹽，羥基、酰胺基、醚鍵等也可作為極性親水基團；而疏水基團常為非極性烴鏈，如8個碳原子以上烴鏈。Tris含有三個羥基和一個氨基，均為良好的親水基團，因此Tris也是合成表面活性劑的重要中間體。
三羥，英文名Tromethamine或Trometamol，簡稱THAM，它是一種應用非常廣泛的有機試劑，可用于制作、有機合成、生物緩沖劑等。其中在生化實驗中，許多蛋白質(zhì)及核酸相關的實驗都需要用THAM作為生物緩沖劑。THAM可由與或在催化劑下高壓反應，然后經(jīng)氮氣、氫氣轉(zhuǎn)換制得。THAM極易溶于水，本身顯堿性，作為緩沖劑時通常需要配合酸一起使用，比如THAM-HCl緩沖液就是比較常用的，除此之外還有許多其他的緩沖液體系。
蛋白制備及純化過程中緩沖液的選擇非常重要，合適緩沖液才能保證蛋白的活性和結(jié)構穩(wěn)定。
當我們純化蛋白時，的就是要保持蛋白在純化過程中不能失活，或者是盡量降低純化過程對蛋白活性帶來的損失。這就意味著蛋白在整個純化過程中要始終保持可溶性和活性。
因此設計一個防止蛋解和聚合的蛋白純化緩沖體系就非常重要了，尤其會凸顯在實驗結(jié)果上。在設計緩沖buffer時應考慮以下幾個因素：pH值、緩沖體系、鹽離子、還原劑和穩(wěn)定劑。其中每一個因素都要根據(jù)你的目的蛋白進行優(yōu)化，并以目的蛋白的活性作為優(yōu)化的評估標準。
許多緩沖液中含有NaCl，以幫助保持蛋白的可溶性和模擬生理條件。一般常用150 mM的NaCl。
在不同的蛋白純化步驟中，可能需要改變鹽離子的濃度。例如，如果是通過離子交換層析進行蛋白純化，一開始需要降低鹽離子的濃度（5~25mM）避免高離子強度和蛋白競爭和填料結(jié)合，這樣可防止蛋白從離子交換柱中流穿，從而使柱子能夠結(jié)合目的蛋白，洗脫除去雜蛋白。
