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發(fā)布時(shí)間：2021-10-10 05:06
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低溫生物知多少？
實(shí)驗(yàn)室的傳代保藏過程
1. 按說明書要求復(fù)溶菌粉，轉(zhuǎn)種于適當(dāng)?shù)脑鼍囵B(yǎng)基內(nèi)（G1），復(fù)壯后轉(zhuǎn)接至平板上，并于適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間，分離出單個(gè)純種菌落，此為第2代（G2）。
2. 鑒定完成后，挑取純菌落制成濃菌懸液用于制備甘油冷凍管，同時(shí)挑取純菌落轉(zhuǎn)接斜面作為工作用。此時(shí)，保藏為第2代，但工作用則為第三代。
3. 將第2代管冷凍保存，將工作用于適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間后可用于試驗(yàn)。
4. 取一支冷凍保存的G2代轉(zhuǎn)種于平板和斜面培養(yǎng)基上，平板上的制成冷凍保藏管第三代（G3），斜面培養(yǎng)基經(jīng)適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間后用作工作用（W3）。
5. 將第三代（G3）冷凍或低溫保存，將生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)種后的G2經(jīng)滅菌處理后丟棄。
6. 當(dāng)工作用代數(shù)小于5時(shí)，可直接用上一代工作用轉(zhuǎn)接下一代工作用，如W3可直接轉(zhuǎn)接為W4。
7. 按上述程序操作，直至G4轉(zhuǎn)為W5為止，需重新開啟安瓿，再重復(fù)上述操作程序、保藏和使用。
以上方法中，被分為兩類。傳代用和工作用，傳代用用于甘油冷凍管法保藏，工作用用斜面低溫保藏法保藏。
實(shí)驗(yàn)證明，甘油冷凍管的有效期至少為2年，但其主要適用于細(xì)菌（需氧）、酵母菌的傳代、保藏、真菌和芽孢類細(xì)菌則需應(yīng)用其它方法。
什么是低溫生物的保藏？
將需要保藏的，接種在適宜的斜面培養(yǎng)基上，菌絲長(zhǎng)滿斜面時(shí)，用硫酸紙包扎棉塞或者硅膠塞，放置在4℃的冰箱中保藏，叫做斜面（）低溫保藏法。由于微生物的新陳代謝活動(dòng)未停止，試管內(nèi)培養(yǎng)基易失水變干。因此，保藏時(shí)間較短，不適于長(zhǎng)期保藏。每隔3～6個(gè)月應(yīng)轉(zhuǎn)管一次。草菇不耐低溫，需保藏在10～12℃之間。或在草菇菌落上灌注3～4毫升的防凍劑（10%的甘油）。當(dāng)菌絲長(zhǎng)滿斜面后，在無菌條件下，用無菌橡皮塞代替棉塞，并用石蠟密封，即可在室溫或冰箱中保藏。這種方法可防止雜菌污染，隔絕氧氣，避免培養(yǎng)基干燥，使用方便。據(jù)測(cè)定，保藏3年的生活力仍很旺盛。
低溫生物菌種的冰凍是怎樣的？
生物體的新陳代謝是隨著溫度的降低而減緩的。如果低溫在0℃以上，這個(gè)減緩過程一般是可逆的，即溫度回升以后，新陳代謝的速度也隨之恢復(fù)。但如溫度降至冰點(diǎn)以下時(shí)，生物體常因結(jié)冰而發(fā)生不可恢復(fù)的損傷。因?yàn)樗械纳矬w體液都含有大量的水（一般在80%左右），細(xì)胞器也都懸浮于水溶液中，新陳代謝過程都是在水溶液或膜和水溶液的界面上進(jìn)行的，所以在結(jié)冰的過程中，一方面由于水的晶體──冰晶硬度較大，對(duì)于生物體內(nèi)的精細(xì)結(jié)構(gòu)會(huì)造成機(jī)械損傷；另一方面由于水結(jié)冰，使細(xì)胞內(nèi)失去了大量可利用的水，造成脫水現(xiàn)象，從而使精細(xì)結(jié)構(gòu)發(fā)生破壞。
低溫生物菌種了解多少？
研究在低溫條件下生命活動(dòng)的生物化學(xué)規(guī)律的新興學(xué)科，是低溫生物學(xué)的重要基礎(chǔ)。例如，在某些冬眠狀態(tài)的昆蟲體液中，甘油含量可高達(dá)25%，以致在-35℃的狀況下也不會(huì)冰凍。另一方面，利用低溫下變化減慢，來研究在常溫下變化較快的一些生物化學(xué)反應(yīng)。如在酶的催化、蛋白質(zhì)和核酸在溶液中的空間構(gòu)象變化中。某些中間變化常溫下在千分之一秒的時(shí)間內(nèi)即可完成，用一般方法難以探討，而在含有添加劑使溫度降至-40℃左右的溶液中，反應(yīng)速度大為減慢就可用常規(guī)方法進(jìn)行研究。
