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非洲為何難以控制？但磁珠法由于磁珠吸附DNA分子的不均衡、且在后續洗脫過程中會造成核酸的斷裂和損失，因此在疑難檢材的檢驗過程中，存在PCR擴增失敗，DNA檢驗不成功的情況。非洲病毒基因組全長 170～190 kb，為有囊膜的雙鏈 DNA 病毒，病毒粒子大小為 175～215 nm，呈正二十面體結構，也是唯i一的蟲媒DNA病毒。非洲病毒是一種急性、熱性、高度接觸性傳i染病，引起豬的死i亡率可達100％，并且非洲具有潛伏期，即使感i染病毒，但沒有臨床癥狀，就有可能通過非實驗室檢驗技術關卡流入市場，進而導致下游食品企業相關問題的出現。

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非洲與傳統相似且綜合癥狀復雜難辨，臨床上類似于急性，表現為高熱、皮膚充血、流i產、水腫和臟器出血。我國因之前不屬于非洲i疫情國家，因此沒有相關的針對性研究，目前采用的是原農i業部檢疫所于1997年與美國梅島動物病研究所共同研究的檢測方法，主要是PCR和ELISA，標準遵循GB/T 18648-2002非洲診斷技術。隨著相關檢測技術的發展，對于非洲的檢測方法也更加完善。PCR技術是目前i簡單、快速的分子學檢測方法，但該方法的敏感性有限，因此以PCR為基礎的更新方法應運而生。復檢為陽性的，企業要在當地市場監管、畜牧獸醫部門監督下，按規定對同批次生豬產品原料進行無害化處理，對相關場所進行徹i底清洗消毒。

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相對定量可以對每個樣本中模版的其實水平之間的差異進行精i確比較，沒必要知道模版的確切拷貝數，并且樣本模板中的相對水平不用使用標準曲線就可以確定。相對定量分析以實時PCR方式執行，在實時PCR分析過程中，PCR基因擴增一直在監控中，在PCR進行期間進行數據采集，而不是在PCR結束時（終點PCR）才獲取數據。在實時PCR中，反應是在目標的擴增早被監測到時用循環中的時間點來描述的，而不是在PCR結束時通過目標的累計數來描述。廣州勱博--養殖場PCRPCR檢測同熒光PCR類似，都是使用的引物和探針以VP72編碼區域作為靶基因設計，該基因研究清楚，且高度保守，即使在滅活或降解的樣品中也可檢測到已知所有22種p72病毒基因型的多個毒株。

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在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后，發射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加完全同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。如測定病i人樣本中病原體的含量、實驗樣本中某一特定的mRNA的含量等。

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FQ-PCR在醫學栓測中有價值的應用領城就是對感i染性疾病的診斷,只要有限的核酸序列清楚,運用FQ-PCR技術,檢測任何病原體。目前,對一些培養周期長或缺乏穩定可靠的檢測手段的病原體,可以考慮用FQ-PCR檢測,為臨床診斷提供依據FQ-PCR對病原體的檢測克服了免i疫學檢測的“窗口期“問題,可判斷疾病是否隱性或亞臨床狀態。FQ-PCR技術可以應用于腫癟的研究及診斷。主要是利用磁珠純化核酸及蛋白質從而達到提取核酸的目的，在細胞、動植物組織等研究方面，一個樣品用一個探針，有效防止樣品之間的交叉污染。

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實時熒光定量PCR的基本原理：理論上，PCR過程是按照2n（n代表PCR循環的次數）指數的方式進行模板的擴增。不同的核酸序列，哪怕僅有一個堿基的差異，也會體現在熔解溫度的差別上。但在實際的PCR反應過程中，隨著反應的進行由于體系中各成分的消耗（主要是由于聚合酶活力的衰減）使得靶序列并非按指數方式擴增，而是按線性的方式增長進入平臺期。因此在起始模板量與終點的熒光信號強度間沒有可靠的相關性。如采用常規的終點檢測法（利用EB染色來判斷擴增產物的多少，從而間接的判斷起始拷貝量），即使起始模板量相同經PCR擴增、EB染色后也完全有可能得到不同的終點熒光信號強度。