動物實驗室肝硬化模型,英瀚斯

實驗動物各種體液、的采集方法

消化液的采集

(一) 唾液

1. 直接抽取法 在急性實驗中， 可用吸管直接插入動物口腔或唾液腺導(dǎo)管抽吸唾液，此法非常簡單，但從口腔抽吸唾液會有雜質(zhì)混入。

2. 制造腮腺瘺法 在慢性實驗中,收集狗的唾液，要用手術(shù)方法將腮腺導(dǎo)管開口移向體外，即以腮腺導(dǎo)管為中心，切成一直徑約2～3cm的圓形粘膜片，將此粘膜片，與周圍組織分開，穿過皮膚切口引到頰外,將帶有導(dǎo)管開口的粘膜片與周圍的皮膚縫合,腮腺分泌的唾液就流出頰外。編號的方法很多，根據(jù)動物的種類數(shù)量和觀察時間長短等因素來選擇合適的標(biāo)記方法。這種方法可以收集到較純凈的唾液。

(二)胃液

1. 直接收集胃液法 急性實驗時，先將動物，將插胃管經(jīng)口插入胃內(nèi),在灌胃管的出口連一，用此可收集到胃液,此法適用于狗等大型動物。實驗動物大、小鼠的采血方法1、動物實驗中剪尾采血：需血量少時可用此方法。如是大鼠,需手術(shù)剖腹，從幽門端向胃內(nèi)插入一塑料管，再由口腔經(jīng)食道將一塑料管插入前胃，用pH7.5、35℃左右的生理鹽水，以12ml/h的流速灌胃，收集流出液，進(jìn)行分析。

2. 制備胃瘺法 在慢性實驗中,收集胃液多用胃瘺法,如全胃瘺法、巴氏小胃瘺法、海氏小胃瘺法等。制備小胃是將動物的胃分離出一小部分，縫合起來形成小胃，主胃與小胃互不相通，主胃進(jìn)行正常消化，從小胃可收集到純凈的胃液。xue清LH和FSH水平在10～12d時降至zui低，以后逐漸上升至56d時恢復(fù)正常。應(yīng)用該法，可以待動物恢復(fù)健康后，在動物清醒狀態(tài)下反復(fù)采集胃液。

(三)胰液和膽汁

在動物實驗中，主要是通過對胰總管和膽總管的插管而獲得胰液或膽汁。狗的胰總管開口于十二指腸降部，在緊靠腸壁處切開胰管，結(jié)扎固定并與導(dǎo)管相連，即可見無色的胰液流入導(dǎo)管。2次實驗之間清洗箱壁及底面，以免上次動物余留的信息影響下次實驗結(jié)果。大鼠的胰管與膽管匯集于一個總管，在其入腸處插管固定，并在近肝門處結(jié)扎和另行插管，可分別收集到胰液和膽汁。

有時也可通過制備胰瘺和膽囊瘺來獲得胰液和膽汁。

根據(jù)GB19489-2004實驗室 生物 安全通用要求,動物實驗室的 生物 安全要點:

動物實驗室的生物安全防護設(shè)施應(yīng)參照BSL1-4實驗室的要求，還應(yīng)考慮對動物呼吸、排泄、毛發(fā)、抓咬、掙扎、逃逸、動物實驗（如染毒、醫(yī)學(xué)檢查、取樣、解剖、檢驗等）、動物飼養(yǎng)、動物及排泄物的處置等過程產(chǎn)生的潛在生物危害的防護。洛桑瑞士聯(lián)邦技術(shù)學(xué)院的GregoireCoultine是這項研究的主要研究者。應(yīng)特別注意對動物源性氣溶膠的防護，例如對動物的剖檢應(yīng)在負(fù)壓剖檢臺上進(jìn)行。

應(yīng)根據(jù)動物的種類、身體大小、生活習(xí)性、實驗?zāi)康牡冗x擇具適當(dāng)防護水平的、專用于動物的、符合國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的 生物安全柜 、動物飼養(yǎng)設(shè)施、動物實驗設(shè)施、消毒設(shè)施和清洗設(shè)施等。

實驗室建筑應(yīng)確保實驗動物不能逃逸，非實驗室動物（如野鼠、昆蟲等）不能進(jìn)入。實驗室設(shè)計（如空間、進(jìn)出通道等）應(yīng)符合所用動物的需要。

動物實驗室空氣不應(yīng)循環(huán)。動物源氣溶膠應(yīng)經(jīng)適當(dāng)?shù)倪^濾/消毒后排出，不能進(jìn)入室內(nèi)循環(huán)。

如動物需要飲用無菌水，供水系統(tǒng)應(yīng)可安全消毒。

動物實驗室內(nèi)的溫度、濕度、照度、噪聲、潔凈度等飼養(yǎng)環(huán)境應(yīng)符合國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求。

大鼠急性肝損傷模型

一． 主要試劑及耗材：

8周齡雄性SD大鼠

對乙酰氨基酚（阿拉丁，A105808）

血生化儀（HITACHI，7100）

PBS（南京生興生物，SN331）

二． 實驗方法：

正式實驗開始前，大鼠禁食12h，然后對乙酰氨基酚組（即模型組）給予450mg/kg的對乙酰氨基酚溶液(用40℃生理鹽水配制)灌胃，空白對照組則采用相等容量的生理鹽水灌胃。

空白對照組：大鼠毛發(fā)光滑，好動，食欲佳；對乙酰氨基酚組（即模型組）大鼠精神萎靡，活動欠佳，食欲減退。

肝組織損傷程度病理學(xué)分級標(biāo)準(zhǔn)：0度（-）：肝細(xì)胞、肝細(xì)胞索、肝竇均正常，未見肝細(xì)胞水腫或空泡的異常改變；實驗動物的選擇小鼠小鼠性情較溫順，一般不會咬人，比較容易抓取固定。1度（ ）：在一個肝小葉中，有1/3以內(nèi)肝細(xì)胞水腫，中央靜脈周圍的肝細(xì)胞核濃染成黑色固縮，分布散在；2度（ ）：在一個肝小葉中，有1/3～1/2以內(nèi)的肝細(xì)胞水腫，肝細(xì)胞明顯疏松化，中央靜脈周圍出現(xiàn)點狀壞死，分布較廣，匯管區(qū)有少量炎細(xì)胞浸潤；3度（ ）：在一個肝小葉中，有1/2以上的肝細(xì)胞水腫，肝細(xì)胞氣球樣變，匯管區(qū)出現(xiàn)炎細(xì)胞浸潤，點狀壞死灶。

空白對照組大鼠組織結(jié)構(gòu)正常，肝索呈狀排列整齊，胞漿著色均勻，細(xì)胞核清晰。對乙酰氨基酚組可見肝小葉中央實質(zhì)細(xì)胞碎片狀壞死，肝小葉結(jié)構(gòu)不清，和索排列紊亂，肝細(xì)胞水腫，胞漿內(nèi)空泡樣變性；可見新生肝細(xì)胞，核仁明顯，少數(shù)雙核的新生肝細(xì)胞。大鼠后眼框靜脈叢取血方法4、動物實驗中頸靜脈或頸動脈采血：將鼠，剪去一側(cè)頸部外側(cè)被毛，作頸靜脈或頸動脈分離手術(shù)，用即可抽出所需血量。小葉內(nèi)可見細(xì)胞浸潤，其中以淋巴細(xì)胞為主，發(fā)生碎片狀壞死病灶處細(xì)胞浸潤明顯。

三． 實驗結(jié)果

3.1 生化檢測

                                       圖：各組ALT、AST、ALP、TBIL和DBIL濃度

由上圖可見，與正常組比，ALT、AST、ALP、TBIL和DBIL 造模后表達(dá)明顯上升。其中ALT、AST和TBIL在24h小時后表達(dá)。ALP在1h 表達(dá)隨后開始下降，36h表達(dá)。圖計為實驗組與正常組使用T檢驗進(jìn)行統(tǒng)計比較。*表示

P<0.05；**表示P<0.01。