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發布時間：2021-03-20 15:34
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ELISA試劑盒的測定原理
測定技術的基礎在于抗原抗體之間的特異結合反應，所以任何的診斷劑離不開好的原料，如抗原抗體，酶等。以前用于測定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原動物后獲得的多抗體和使用雜交瘤技術得到的抗體，而抗原或抗體的標記物如酶標結合物則通過各種化學合成方法制備。近年來，隨著分子生物學的發展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結合物等測定試劑幾成為現實的新一代試劑，各種新型使用的測定方法也不斷出現。
Elisa試劑盒實驗原理
將目標抗體包被于微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標準品或標本，其中的目標連接于固相載體上的抗體結合，然后加入微生物化的目標抗體，將未結合的生物素抗體洗凈后，加入HRP標記和親和素，再次徹底洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標呈正相關。在450nm波長下測定吸光度（O.D.值），計算樣品濃度。
Elisa試劑盒——Elisa實驗常見問題及解決方案
不正常的標準曲線
1 錯誤的方法重懸標準品 加入正確量的溶液重懸標準品，重懸充分
2 標準品稀釋錯誤 按照說明書要求稀釋標準品
3 標準品污染 使用一次性的滅菌吸頭， 標準品貯存于2-8 ℃
4 錯誤的倍比稀釋步驟 按照說明書倍比稀釋標準品
5 波長選擇錯誤 TMB為底物和以OPD為底物的試劑盒均有使用，而 前者比色波長為450nm，后者為492nm。雙波長比色分析優于單波長。
6 標準品混用 不同批號試劑勿混用
7 試劑盒在運輸途中時間太長，溫度太高，標準品失活 盡量縮短運輸時間，夏季應放冰塊降溫
8 ELISA未終止而直接檢測450nm和620nm TMB顯色需終止后檢測，否則會出現620nm比450nm讀數高的現象。（數值仍有梯度規律）
