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發布時間：2021-08-25 02:55
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斜面低溫保藏法對那些能夠使用
此方法是很常用的，廣泛適用于細菌、酵母菌和霉菌等大多數微生物的短期保藏及不宜用冷凍干燥保藏的。
此方法的缺點是菌株仍有一定程度的代謝活動能力，保藏期短，傳代次數多，較容易發生變異和被污染。
正常情況下的保菌期：霉菌和有芽孢的細菌一般可保存6個月左右，無芽孢的細菌可保存1個月左右，酵母菌可保存3個月左右。
如何對微生物進行活化
1 定期移植法的復蘇較簡單，直接轉接即可；
2 液體石蠟法保存的在復蘇時，挑取少量菌體轉接在適宜的新鮮培養基上，生長繁殖后，再重新轉接一次；
3 沙土管法保存在復蘇時，在無菌條件下打開沙土管，取部分沙土粒于適宜的斜面培養基上，長出菌落后再轉接一次。或取沙土粒于適宜的液體培養基中，增殖培養后再轉接斜面；
4 真空冷凍干燥法保存在復蘇時先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部，將安瓿管頂部燒熱， 用無菌棉簽沾冷水，在頂部擦一圈，頂部出現裂紋，用挫刀或鑷子頸部輕叩一下，敲下已開裂的安瓿管的頂端，用無菌水或培養液溶解菌塊，使用無菌吸管移入新鮮培養基上，進行適溫培養；
5 -80℃ 冰箱凍結法保存復蘇時，從冰箱中取出安瓿管或塑料凍存管，應立即放置38℃-40℃水浴中快速復蘇并適當快速搖動。直到內部結冰全部溶解為止，約需50秒-100秒。開啟安瓿管或塑料凍存管，將內容物移至適宜的培養基上進行培養
6 液氮超低溫凍結法保存復蘇與-80℃ 冰箱凍結法保存復蘇相似，從液氮罐中取出安瓿管或塑料凍存管，應立即放置在38℃-40℃水浴中快速復蘇并適當搖動。直到內部結冰全部溶解為止，一般約需50秒-100秒。開啟安瓿管或塑料凍存管，將內容物移至適宜的培養基上進行培養。
低溫生物保藏有雙重“保險”
作為我國可同時提供一般資源服務和生物材料保存的保藏中心，保藏中心于1995年被列入“布達佩斯條約國際保藏單位”，成為一個持有國際牌照的微生物“銀行”。
“這里主要是收集、保藏、鑒定、交換和供應各類生物材料。”一些研發中分離出的，暫時不知道有什么功能，就作為資源儲備儲存；而研究課題需要收集、篩選的菌類，結題后也可存放備份。幾十年來，保藏中心共提供了幾十萬株各類微生物，在我國生命科學和生物技術研發中貢獻。
低溫生物的液氮冷凍保藏法
(1)準備安瓿管用于液氮保藏的安瓿管，要求能耐受溫度突然變化而不致破碎，因此，需要采用硼硅酸鹽玻璃制造的安瓿管，安瓿管的大小通常使用75×10mm的，或能容1.2mm液體的。
(2)加保護劑與滅菌保存細菌、酵母菌或霉菌孢子等容易分散的細胞時，則將空安瓿管塞上棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃滅菌15分鐘:若作保存霉菌菌絲體用則需在安瓿管內預先加入保護劑如10%的甘油蒸餾水溶液或10%二甲亞砜蒸餾水溶液，加入量以能浸沒以后加入的菌落圓塊為限，而后再用1.05kg/cm2>，121.3℃滅菌15分鐘。
(3)接入將用10%的甘油蒸餾水溶液制成菌懸液，裝入已滅菌的安瓿管;霉菌菌絲體則可用滅菌打孔器，從平板內切取菌落圓塊，放入含有保護劑的安瓿管內，然后用火焰熔封。浸入水中檢查有無漏洞。
(4)凍結再將已封口的安瓿管以每分鐘下降1℃的慢速凍結至-30℃。若細胞急劇冷凍，則在細胞內會形成冰的結晶，因而降低存活率。
(5)保藏經凍結至-30℃的安瓿管立即放入液氮冷凍保藏器(圖Ⅶ-14)的小圓筒內，然后再將小圓筒放入液氮保藏器內。液氮保藏器內的氣相為-150℃，液態氮內為-196℃。
(6)恢復培養保藏的需要用時，將安瓿管取出，立即放入38-40℃的水浴中進行急劇解凍，直到全部融化為止。再打開安瓿管，將內容物移入適宜的培養基上培養。
此法除適宜于一般微生物的保藏外，對一些用冷凍干燥法都難以保存的微生物如支原體、衣原體、氫細菌、難以形成孢子的霉菌、噬菌體及動物細胞均可長期保藏，而且性狀不變異。缺點是需要特殊設備。
