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發布時間：2021-07-12 10:54
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ELISA試劑盒的測定原理
測定技術的基礎在于抗原之間的特異結合反應，所以任何的診斷劑離不開好的原料，如抗原，酶等。以前用于測定的抗原通常為各種純化抗原，而則為純化抗原動物后獲得的多和使用雜交瘤技術得到的，而抗原或的標記物如酶標結合物則通過各種化學合成方法制備。近年來，隨著分子生物學的發展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或及其酶結合物等測定試劑幾成為現實的新一代試劑，各種新型使用的測定方法也不斷出現。
ELISA試劑盒的試驗原理
試劑盒是固相夾心法酶聯吸附實驗（ELISA）.已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關系。
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Elisa試劑盒的注意事項
Elisa試劑盒是否滅活：加熱可滅清中補體系統，在較少數情況下（培養ES細胞，平滑肌細胞時）建議滅活，在培養其余細胞時不建議滅清。滅活非常容易產生沉淀，如必須滅活請按56℃，30 min，輕微搖晃原則操作，滅活溫度高、時間長、搖晃不均都容易產生沉淀。
Elisa試劑盒培養基：無培養基在結果重復性、細胞體外分化方面有優勢，但是，仍然是培養液中基本的添加物，尤其是在原代培養或細胞生長狀態不良時，常常會先使用有的培養液進行培養，待細胞生長旺盛后再換成培養液。
Elisa試劑盒——Elisa實驗常見問題及解決方案
重復性不佳，高CV值
1 樣品不均一 加樣前充分混勻樣品，取樣確保移液位置一致；
2 包被板表面遭到破壞 洗板加樣時盡量小心，避免破壞板的包被表面
3 孔與孔之間的交叉污染 孵育后取下蓋子小心操作，避免孔與孔的污染；封板膜不能重復使用
4 加樣量不一致 樣品稀釋前應充分混勻，盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴
5 邊緣效應（外周孔顯色較中心孔深） 孵育時盡量100 rpm旋轉混勻
6 微量加樣不準確 保證微量加樣的準確性和均一性
7 不正確的洗滌 洗液準確配制；充分洗滌，靜置15秒，確定每一步的洗滌
