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發布時間：2021-10-04 19:04
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實驗室級別的制備液相色譜主要用于以下領域
1.天然藥品化學、中藥化學。這是國內目前廣泛的使用方法，為了弄清楚植物中的微量有效成分，開放手工色譜柱早已不夠用了，幾乎每個搞天然藥化的實驗室都至少有一臺液相，土豪實驗室人手一臺液相。
2.蛋白純化。相對于前者，蛋白純化的起步要稍微晚一點，但是發展很迅速。同時，由于外國儀器廠家在這個領域的優勢不算太大，目前國內也在這個領域加快發展，搶占地盤。
3.藥品雜質純化。由于合成工藝并不能做到100%的產率，往往伴有副產品，如何獲得微量的雜質并確定結構和含量，這就得靠液相色譜。
4.手性化合物的制備。這個主要是有機合成和方法學的在用。
液相色譜的發展變化介紹
液相色譜色譜法按分離機制的不同分為液固吸附色譜法、液液分配色譜法（正相與反相）、離子交換色譜法、離子對色譜法及分子排阻色譜法。 液相色譜的發展，涉及鍵合相，基于被測物質在固定相（含液體）和流動相之間的相對溶解度的差異，通過溶質在兩相之間進行分配以實現分離。將固定液機械地涂漬在擔體上組成固定相。化學鍵合固定相。這種固定相是通過化學反應把各種不同的有機基團鍵合到硅膠（載體）表面的游離羥基上，代替機械涂漬的液體固定相。這不僅避免了液體固定相流失的困擾，還大大改善了固定相的功能，提高了分離的選擇性，化學鍵合色譜適用于分離幾乎所有類型的化合物。
液相色譜儀分類
液相色譜儀依據樣品在固定相和流動相分離過程的物理化學原理，可分為以下五種。
1、吸附色譜：
用固體吸附劑作固定相，以不同極性溶劑作流動相，依據樣品中各組分在吸附劑上吸附性能的差別來實現分離。
2、分配色譜：
用載帶在固相基體上的固定液作固定相，以不同極性溶質作流動相，依據樣品中各組分在固定液上分配性能的差別來實現分離。根據固定相和液體流動相相對極性的差別，又可分為正相分配色譜和反相分配色譜。當固定相的極性大于流動相的極性時，可稱為正相分配色譜或簡稱正相色譜;若固定相的極性小于流動相的極性時，可稱為反相分配色譜或簡稱反相色譜。
3、離子色譜：
用微粒離子交換劑作固定相，以具有一定pH值的緩沖溶液作流動相，依據離子型化合物中各離子組分與離子交換劑上表面帶電荷基團進行可逆性離子交換能力的差別而實現分離。
4、體積排阻色譜：
用化學惰性的多孔性凝膠作固定相，按固定相對樣品中各組分分子體積排阻滯作用的差別來實現分離。以水溶液作流動相的體積排阻色譜柱，稱為凝膠過濾色譜;以有作流動相的體積排阻色譜法，稱為凝膠滲透色譜法。
5、親和色譜：
以在不同基體上，鍵合多種不同特性的配位體作固定相，用具有不同pH值的緩沖溶液作流動相，依據生物分子與基體上鍵聯的配位體之間存在特異性親和作用能力的差別，而實現對具有生物活性的生物分子的分離。
制備液相色譜特點和優點
高壓—壓力可達150~300Kg/cm2。色譜柱每米降的壓為75 Kg/cm2以上。
高速—流速為0.1~10.0 ml/min。
高效—可達5000塔板每米。在一根柱中同時分離成份可達100種。
高靈敏度—紫外檢測器靈敏度可達0.01ng。同時消耗樣品少。
HPLC與經典液相色譜相比有以下優點：
速度快—通常分析一個樣品在15~30 min，有些樣品甚至在5 min內即可完成。
分辨率高—可選擇固定相和流動相以達到較好分離效果。
靈敏度高—紫外檢測器可達0.01ng，熒光和電化學檢測器可達0.1pg。
柱子可反復使用—用一根色譜柱可分離不同的化合物。
樣品量少，容易回收—樣品經過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。
