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發(fā)布時間:2021-06-06 09:30  
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為避免提取的核酸在柜內(nèi)反復循環(huán),造成標本之間的交叉污染,出現(xiàn)假陽性結(jié)果,該區(qū)域配備的生物安全柜必須是B2型的。生物安全柜工作區(qū)垂直氣流全部來自實驗室,排風經(jīng)過過濾器(www.rfilter.com)過濾后直接排至室外,不允許回到安全柜和實驗室中。
根據(jù)經(jīng)驗,如果實驗室內(nèi)配備生物安全柜,每配備一臺,實驗室的面積增加10m2;標本制備區(qū)的面積宜在25m2~30m2之間。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為正壓,以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。
擴增室該區(qū)域主要進行的操作為DNA或cDNA擴增。此外,已制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。
在巢式PCR測定中,通常在輪擴增后必須打開反應管,因此巢式擴增有較高的污染危險性,第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進行。
擴增室主要配備PCR實驗室的核心儀器PCR儀,本文實例中使用了ABI7500和ABI9700兩種PCR儀。
在實驗室建造過程中,需要給PCR儀配備專門的UPS電源,以保證其正常工作。該區(qū)面積控制在15m2~20m2。
本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內(nèi)進行。建議采用5~10Pa壓差,在控制上比較容易實現(xiàn)。


新型冠狀病毒核酸檢測PCR實驗室的建設要點
1.核酸檢測實驗室介紹核酸檢測實驗室是分子生物學研究和實驗的常規(guī)方法,也是生物學、醫(yī)學臨床等領(lǐng)域廣泛應用的實驗技術(shù)。 實驗室通常分為四個區(qū)域,即:試劑準備區(qū)、樣品制備區(qū)、核酸配制和擴增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)(如使用全自動分析儀,區(qū)域可適當合并)。 進入各個區(qū)域必須嚴格按照單一方向進行(單向走廊),不同的工作區(qū)域使用不同的工作服(例如不同的顏色)。工作人員離開時,不得將工作服帶出。
1.3.實驗室建設的幾個關(guān)鍵點:1、生物安全:按照新型冠狀病毒實驗室生物安全指南(第二版)的規(guī)定,2019-nCoV病原體暫按照第二類病原微生物進行管理,則樣本植被區(qū)宜為負壓或加強型P2實驗室,核酸操作應在生物安全柜內(nèi)進行。關(guān)鍵技術(shù)措施包括:
負壓(避免室內(nèi)潛在污染外泄)
氣流組織(室內(nèi)定向流,從低污染風險區(qū)流向高污染風險區(qū))
排風無害化處理(過濾、高空排放)
2、平面布局:不論是組合式還是分散式布置的PCR實驗室,各功能房間均宜設置獨立緩沖間
