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              發布時間:2021-09-14 09:25  

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              ELISA試劑盒的應用技術

              ELISA檢測試劑盒應用定性夾心檢測技術,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段,分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標準品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM,這些就會與HEV 的多肽抗原結合,并固定在上面,洗板除去其它非特異性和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結合物,經第二次孵育后,酶結合物就會與孵育結合上的HEV IgM相結合,洗板除去未結合的酶結合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育時會發生酶-底物反應,只有那些含有HEV IgM和酶結合物所形成的復合物的孔才會發生顏色變化,加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應,并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgMelisa試劑盒的測試標準, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽性。



              ELISA試劑盒的發展前景

              臨床測定技術的發展主要在于方法學的發展,而方法學的發展依托于試劑生產技術不斷進步更新和型標記物的應用。分子生物學正在并肯定會讓對整個生命科學有一個徹底的認識,其對測定技術發展的影響也是直接而又有效的,對以些難以檢測的生物活性物質的測定,并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。

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              Elisa試劑盒實驗原理

              將目標包被于微孔板中,制成固相載體,向微孔中分別加入標準品或標本,其中的目標連接于固相載體上的結合,然后加入微生物化的目標,將未結合的生物素洗凈后,加入HRP標記和親和素,再次徹底洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標呈正相關。在450nm波長下測定吸光度(O.D.值),計算樣品濃度。



              Elisa試劑盒原理及用途

              本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測肌肉組織、牛奶等樣品中的米松(Dexamethasone,DEX),試劑盒由預包被偶聯抗原的酶標板、酶標記物、、標準品及其他配套試劑組成。檢測時,加入標準品或樣品溶液,樣本中的米松藥品和酶標板上預包被偶聯抗原競爭抗米松藥類,加入酶標記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含米松藥品含量成負相關,與標準曲線比較即可得出樣本中米松藥品的殘留量。



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