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發(fā)布時(shí)間:2021-01-20 06:29  
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原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行定量定位的過(guò)程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。武漢邁斯普生物科技有限公司是一家專(zhuān)業(yè)從事生物醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)、技術(shù)咨詢及產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的生物技術(shù)服務(wù)企業(yè)。公司坐落于武漢光谷,由3位歸國(guó)博士領(lǐng)銜創(chuàng)辦。公司長(zhǎng)期致力于建立并完善多項(xiàng)基礎(chǔ)生物技術(shù)服務(wù)平臺(tái)。現(xiàn)憑借自身技術(shù)特色,依托光谷生物城技術(shù)產(chǎn)業(yè)優(yōu)勢(shì),面向全國(guó)提供的生物技術(shù)服務(wù)。熒光原位雜交技術(shù)是一種重要的非性原位雜交技術(shù),原理是利用報(bào)告分子(如生物素、等)標(biāo)記核酸探針,然后將探針與染色體或DNA纖維切片上的靶DNA雜交,若兩者同源互補(bǔ),即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。
Fields等人的工作標(biāo)志雙雜交系統(tǒng)的正式建立。他們以與調(diào)控SUC2基因有關(guān)的兩個(gè)蛋白質(zhì)Snf1和Snf2為模型,將前者與Gal4的BD結(jié)構(gòu)域融合,另外一個(gè)與Gal4的AD結(jié)構(gòu)域的酸性區(qū)域融合,由BD和AD形成的融合蛋白一般分別稱(chēng)之為“誘餌”(bait)和“獵物”或靶蛋白(prey or target protein)。
原位雜交在前。
(1)常規(guī)脫蠟入水。
(2)37℃蛋白酶K消化20min,37℃漂洗液充分洗去蛋白酶K。
(3)滴加探針,加蓋玻片,避光、濕盒、37℃過(guò)夜孵育。
(4)如果試劑盒允許的話,將試劑盒中洗脫液水浴加溫至37℃震蕩洗脫多余的探針。
(5)加堿性磷酸酶標(biāo)記的抗1體,37℃孵育半小時(shí),洗去抗1體后顯色。
免1疫組化在后。
(1)將顯色后確認(rèn)為陽(yáng)性的切片充分漂洗。
(2)在PH為6.0的枸櫞酸鈉溶液中,微波至96℃左右,作用10min。
(3)滴加一抗,37℃濕盒孵育2h。
(4)充分漂洗切片,滴加二抗,室溫下孵育40-50min。
(5)DAB顯色后,采用PBS中止顯色反應(yīng)。
(6)不要復(fù)染核,不然就蓋住原位雜交信號(hào)了。