植物原位雜交誠信企業「邁斯普」

武漢邁斯普生物科技有限公司是一家專業從事生物醫學技術服務、技術咨詢及產品開發的生物技術服務企業。公司坐落于武漢光谷，由3位歸國博士創辦。公司長期致力于建立并完善多項基礎生物技術服務平臺。現憑借自身技術特色，依托光谷生物城技術產業優勢，面向全國提供的生物技術服務。在研究植物目的基因時空表達及分布時，我們常采用XX辛標記的探針來做植物原位雜交。

雙雜交系統的建立得力于對真核生物調控轉錄起始過程的認識。細胞起始基因轉錄需要有反式轉錄因子的參與。80年代的工作表明， 轉錄因子在結構上是組件式的（modular）， 即這些因子往往由兩個或兩個以上相互獨立的結構域構成，其中有DNA結合結構域（DNA binding domain，簡稱為BD）和轉錄結構域（activation domain，簡稱為AD），它們是轉錄因子發揮功能所必需的。

探針標記。市售的探針盒子花樣繁多，盡量選擇大品牌的試劑盒。嚴格按照其操作步驟和條件進行。不同廠家的盒子中使用的酶存在差異，因此這一步操作需要根據實際情況操作。

雜交液滴到組織上后不要太用力掀開蓋玻片，而是在漂洗的時候采用滴管在其側面滴洗，輕輕沖下蓋玻片。這一步是很有必要的！而在封片時，一定要密封好玻片，可以采用凝膠類的物質封住四周。

原位雜交在前。

（1）常規脫蠟入水。

（2）37℃蛋白酶K消化20min，37℃漂洗液充分洗去蛋白酶K。

（3）滴加探針，加蓋玻片，避光、濕盒、37℃過夜孵育。

（4）如果試劑盒允許的話，將試劑盒中洗脫液水浴加溫至37℃震蕩洗脫多余的探針。

（5）加堿性磷酸酶標記的抗1體，37℃孵育半小時，洗去抗1體后顯色。

免1疫組化在后。

（1）將顯色后確認為陽性的切片充分漂洗。

（2）在PH為6.0的枸櫞酸鈉溶液中，微波至96℃左右，作用10min。

（3）滴加一抗，37℃濕盒孵育2h。

（4）充分漂洗切片，滴加二抗，室溫下孵育40-50min。

（5）DAB顯色后，采用PBS中止顯色反應。

（6）不要復染核，不然就蓋住原位雜交信號了。