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如何用制備色譜柱制備低含量的雜質？

制備色譜柱為ZorbaxSB-C18 9.4*250mm及gilson餾分收集器，色譜儀為Agilent1100或LC-6A。想用其制備面積歸一化法含量為0.05%左右的雜質，初步提純后用高分辨的LC-MS進行定性分析。如何設定色譜條件，如，流量、進樣量、樣品的濃度、切割點的設置、是否要濃縮，要求將95%以上的主峰切除。

（主峰后有二個雜質靠得很近。）

答：

1.制備用的流動相盡量等級高一點，否則流動相中的雜質會影響LC-MS分析。

2.使用餾分收集器時，延遲體積一定要計算準確，檢測器的響應時間設到很小，否則都會影響收集的純度和回收率。制備柱的流速一般與直徑的平方成正比，如果4.6mm分析柱流速為1mL/min，9.4mm制備柱用1*（9.4/4.6）2,大約為4mL/min。進樣量設到幾個mg應該基本沒有過載。進樣樣品濃度越高越好。假如進樣10mg，理論計算0.05%的雜質大約只有5μg，顯然濃度太低，盡量是多做幾次，合并餾分然后濃縮后做LC-MS分析。

工業制備色譜

分離純化技術是制藥過程的核心環節之一。分離純化技術的優劣直接關系到的品質和安全性，而且影響到制藥企業的效益和市場競爭力，尋求經濟、高效綠色的新型分離純化技術一直受到廣泛的重視。工業制備色譜技術具有高效、高選擇性、能耗和溶劑消耗低、廢棄物排放少以及自動化程度高等優點，在分離純化中的應用和需求日益廣泛，是我國產業升級的重要發展方向工業制備色譜分離材料和分離方法開發是工業制備色譜技術實現在各方面應用的基礎。

以重組DNA技術為標志的現代生物技術是當代高科技的核心之一,其發展將改變醫學農業、食品、能源、化學、環境等科學領域的傳統面貌，促進人類社會生產力和科學技術的巨大進步，通常，生物技術產品的分離、純化、直至得到符合需求的產品需要通過許多步驟才能實現。其中，吸附和液相色譜常常是其主要的、有時甚至是關鍵的分離技術之一。

現代生物技術的迅速發展及其產業化對其下游過程，即生物技術產品(尤其是各種蛋白質)的分離純化技術提出了迫切的需求。通過發酵和動、植物細胞培養等生成的目標產物需通過一系列的分離和純化等步驟才能獲得終的產品。通常，生物技術產品生產中分離提純成本要占其生產總成本的40%~90%。在以小分子產品為主的傳統發酵工業中分離成本要占總成本的60%左右，而以蛋白質為代表的現代基因工程產品則有時可高達90%左右。作為生物工程的一個組成部分，分離技術在其產品實現中起到重要作用。