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              發布時間:2021-01-13 13:49  

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              如何鑒別熒光顯微鏡

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              熒光顯微鏡和普通顯微鏡有以下的區別:

              1.照明方式通常為落射式,即光源通過物鏡投射于樣品上;

              2.光源為紫外光,波長較短,分辨力率高于普通顯微鏡;

              3.有兩個特殊的濾光片,光源前的用以濾除可見光,目鏡和物鏡之間的用于濾除紫外線,用以保護人眼。



              熒光顯微鏡——物鏡

              各種物鏡均可應用,但盡量用消色差的物鏡,因其自體熒光極微且透光性能(波長范圍)適合于熒光。由于圖像在顯微鏡視野中的熒光亮度與物鏡鏡口率的平方成正比,而與其放大倍數成反比,所以為了提高熒光圖像的亮度,應使用鏡口率大的物鏡。尤其在高倍放大 時其影響非常明顯。因此對熒光不夠強的標本,應使用鏡口率大的物鏡,配合以盡可能低的目鏡。

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              熒光顯微鏡的標本制作要求

              1、載玻片

              載玻片厚度應在0.8~1.2mm之間,太厚的坡片, 一方面光吸收多,另一方面不能使激發光在標本上聚集。載玻片必須光潔,厚度均勻,無明顯自發熒光。有時需用石英玻璃載玻片。

              2、蓋玻片

              蓋玻片厚度在0.17mm左右,光潔。為了加強激發光 ,也可用干涉蓋玻片,這是一種表面鍍有若干層對不同波長的光起到不同干涉作用的物質(如氟化鎂)的蓋玻片,它可以使熒光順利通過,而反射激發光,這種反射的激發光可激發標本。

              3、標本

              組織切片或其他標本不能太厚,若太厚激發光大部分消耗在標本下部,而物鏡直接觀察到的上部不充分激發。另外,細胞重疊或雜質掩蓋,影響判斷。

              4、封裱劑

              封裱劑常用甘油,必須無自發熒光,無色透明,熒光的亮度在pH8.5~9.5時較亮,不易很快褪去 。

              5、鏡油

              一般暗視野熒光顯微鏡和用油鏡觀察標本時,必須使用鏡油,盡量使用無熒光鏡油,也可用上述甘油代替,液體石蠟也可用,只是折光率較低,對圖像質量略有影響。

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