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發布時間:2021-04-26 03:17  
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相對于弱酸性化合物而言,弱堿性化合物在陽離子交換固相萃取過程中99%的分解都是陽離子,這一弱堿性化合物所處的環境系統的 pH值必須低于其 pKa至少兩個 pH單位。洗脫時,環境體系的 pH值應高于化合物的 pKa值至少兩個 pH單位,99%的化合物此時為中性狀態,可通過適當的溶劑從陽離子交換柱中洗脫。
選擇離子交換固相萃取柱的種類:為能有效地洗脫吸附在一起的離子化合物,對于含有強離子官能團的目標化合物,一般選用弱離子交換柱;對于含有弱離子官能團的化合物,一般選用強離子交換柱。該方法可避免目標化合物與吸附劑官能團同時處于離子化狀態,使目標化合物始終保持在不能洗脫的保留狀態。
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反相式C18分離柱
C18是十八烷基碳鏈上的反相固定相的統稱。除以普通硅膠為基質外,以C18鏈為基質的高聚物小球、氧化鋁、氧化鋯等反相固定相,均可稱為C18鏈。有很多種類型的C18,常見的C18是硅膠基質,稱為 ODS,C18能夠在純水中工作,被稱為C18-AQ。
C18反相柱的固定相為非極性固定相,流動相極性大于固定相極性,常用的溶劑一般為水和甲1醇、乙1腈、四氫呋1喃、異丙1醇等與水互溶的溶劑,適合分離非極性或弱極性的化合物,其洗脫順序一般為樣品極性從高到低。
反相分離柱C18的適用范圍
C18反相分離柱廣泛應用于天然產物的提取,藥1物合成研究與開發,生物制藥等領域。若樣品極性偏大, Rf值非常接近,則不能分離正相模式;終產物要求純度98%以上,采用正相模式達不到;樣品在正相條件下存在溶解問題——不妨考慮采用反相C18模式分離。由于其填料粘合技術的成熟和良好的分離能力,C18柱已成為日常接觸分離提純研究人員zui多的反相柱。
反相式C18反相分離柱的主要參數
分離柱C18有多種參數,大致可分為四個方面:相鍵(包括修飾、封端)、填充載體(硅膠純度、填充顆粒類型、粒徑、孔徑)、柱體本身(柱效、柱內徑、柱長)和隱藏參數(比表面積、碳含量等)。小編想選擇以下幾個大家容易忽略的
反向作用機制:
反相萃取分離主要是利用固相萃取材料官能團與目標化合物碳氫鍵之間的非極性作用力。反相非極性的 SPE柱通常更適合從極性基質中提取分離出非極性和中等極性的目標化合物。
對利用非極性作用力吸附于非極性 SPE柱的目標化合物,可用氯1仿、環己1烷、乙1酸乙1酯等具有非極性的溶劑洗脫。當溶劑的洗脫強度足夠大,可以使目標化合物與吸附劑非極性基團間的范德華力不受影響時,使其在 SPE柱中順利洗脫。即使是極性更強的甲1醇,對許多化合物而言,也有足夠的非極性力量來洗脫它。有時候,單種溶劑無法完全洗脫疏水性的目標化合物,可以考慮使用二氯甲1烷:乙1酸乙1酯(1:1,體積比)。
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一般來說,我們需要分離的混合物的性質各不相同,很難通過調整 PH來達到要求。一般而言,在改變流動相 PH的基礎上,又加入緩沖鹽以改變組分的選擇性和分離程度。大多數C18反相分離柱在使用
一、強酸淋洗、強堿
用硅膠作載體的粘結相填料,其使用要求是:流動相 PH值在2.5-7.5之間。在 PH<2時,流動相可能與載體硅膠和合相發生水解反應,從而導致碳鏈損失;在 PH<7時,流動相可能使載體硅膠溶解。因此,硅膠基體C18 (即 ODS)在強堿條件下基本壽命較短,聚合體C18雖然能在高堿性條件下穩定工作,但其價格昂貴,分離性能及模組強度均不如 ODS。
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改進凈化方式
在一般情況下,目標化合物模式比雜質模式的凈化效果要好,如果要分析的是某種特定種類的化合物,則較好是用保留目標化合物的模式來分析;舉一個簡單的例子,也就是對蔬菜中的多菌靈和塞菌靈(一類堿性農1藥)進行分析,用陽離子交換柱可專一性地保留這些農1藥,使其與干擾物基本完全分離,而用正相吸附劑或石墨化炭黑進行保留干擾物的操作只能去除主要的干擾物,保留干擾物的數量較多。
此外,如果可以用多個 SPE柱對目標化合物進行凈化,應選擇選擇性好的吸附劑;選擇性越高,離子交換>正相>反相。