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發(fā)布時間:2021-07-25 15:28  
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重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)是近年來建立起的一種新的核酸恒溫擴(kuò)增技術(shù),具有操作簡單、靈敏度高、特異性強(qiáng)、可在短時間內(nèi)快速擴(kuò)增出目的片段等優(yōu)點(diǎn),在動物疾病早期診斷、現(xiàn)地檢測、進(jìn)出口快速檢疫等方面具有良好的應(yīng)用前景。
重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物,能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就會發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動 DNA合成,對模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的 DNA鏈與SSB結(jié)合,防止進(jìn)一步替換。在這個體系中,由兩個相對的引物起始一個合成事件。
等溫核酸試劑盒應(yīng)用
一種基于CRISPRCas的常溫等溫快速檢測核糖核酸的技術(shù)及檢測方法.本發(fā)明旨在生物體外利用公開的多種基因工程酶與化學(xué)組分進(jìn)行核糖核酸擴(kuò)增,并通過一種或多種核酸酶,在常溫等溫條件下實(shí)現(xiàn)快速,一步或兩步的完成特定核糖核酸(RNA)或脫氧核糖核酸(DNA)的擴(kuò)增與檢測過程,使對各種核酸的檢測更快速和更簡便.包括以下步驟:(1)通過核酸提取得到待檢測樣本的RNA或單鏈DNA或雙鏈DNA;(2)利用逆轉(zhuǎn)錄酶,轉(zhuǎn)錄酶,核糖核酸酶H,CRISPR相關(guān)蛋白13的組合酶以及核酸熒光探針與待檢核酸在等溫進(jìn)行反應(yīng),若待檢測核酸為DNA,在反應(yīng)前增加預(yù)變性的步驟;(3)通過檢測熒光信號,判斷待檢測樣本中是否存在目標(biāo)核酸。