然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結合物,經第二次孵育后,酶結合物就會與次孵育結合上的HEV IgM相結合,洗板除去未結合的酶結合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育時會發生酶-底物反應,只有那些含有HEV IgM和酶結合物所形成的復合物的孔才會發生顏色變化,加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應
終止液(3M H2SO4):蒸餾水178.3ml,逐滴加入(98%)21.7ml。(5) 底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml0.1M檸檬酸(19.2克/L) 24.3ml加蒸餾水50ml。(6) TMB(四)使用液:TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml底物緩沖液(PH5.5) 10ml0.75%H2O2 32μl(7) ABTS使用液:ABTS 0.5mg底物緩沖液(PH5.5) 1ml3%H2O2 2μl(8) 抗原、和酶標記。(9) 正常人和陽性對照。
做好對照正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證實驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應,可采用羊、兔或BSA等封閉。實驗條件的選擇在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:(1) 固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚、聚、聚丙酰胺和纖維素等。

需要而未提供的試劑和器材1. (450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
試劑準備試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
技術團隊具有在該領域5年以上的理化測定經驗,時時關注相關科研方向的研究結果,并與公司的檢測技術,試劑盒研發相結合。