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ELISA定量測定

ELISA操作步驟復雜，影響反應因素較多，特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線。測定大分子量物質的夾心法ELISA，標準曲線的范圍一般較寬，曲線zui高點的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數值，以檢測物的濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，將各濃度的值逐點連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，中央較呈直線的部分是相對理想的檢測區域。

測定小分子量物質常用競爭法，其標準曲線中吸光度與受檢物質的濃度呈負相關。標準曲線的形狀因試劑盒所用模式的差別而略有不同。ELISA測定的標準曲線注意圖中橫坐標為對數關系，這更有利于測定系統的表達。

tRNA二級結構

約50%堿基配對，形成四段雙螺旋，與五段非配對序列形成三葉草形結構。

該結構中存在四臂四環：

①氨基酸臂。 

②二氫尿C4H4N2臂（DHU臂、D臂）和二氫尿C4H4N2環（DHU環、D環），特征是含二氫尿C4H4N2（DHU、D）。 

③反密碼子臂和反密碼子環，特征是反密碼子環含反密碼子。反密碼子5′端與尿苷酸連接，3′端與piao呤核苷酸連接。TΨC臂（T臂）和TΨC環（Ψ環），特征是TΨC環含胸腺C4H4N2核糖核苷酸T54假尿苷酸Ψ55胞苷酸C56。

④額外環3~21nt。

tRNA三級結構呈L形，氨基酸結合位點位于其一端，反密碼子環位于其另一端，DHU環和TΨC環雖然在二級結構中位于兩側，但在三級結構中卻相鄰。盡管各種tRNA的長度和序列不盡相同，但其三級結構相似，提示三級結構與其功能密切相關。

DNA提取過程中各種試劑的作用及原理

溶液II-NaOH-SDS液：NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是穩定的。但當pH>12或pH<3時，就會引起雙鏈之間氫鍵的解離而變性。 在溶液II中的NaOH濃度為0.2mo1/L，加抽提液時，該系統的pH就高達12.6， 因而促使染色體DNA與質粒DNA的變性。

　　SDS：

　　SDS是離子型表面活性劑。它主要功能有：

　　(1)溶解細胞膜上的脂質與蛋白，因而溶解膜蛋白而破壞細胞膜。

　　(2)解聚細胞中的核蛋白。

　　(3)SDS能與蛋白質結合成為R-O-SO3-…R -蛋白質的復合物，使蛋白質變性而沉淀下來。 但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取過程中，必須把它去除干凈，防止在下一步操作中 (用RNase去除RNA時)受到干擾。