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正相模式是指SPE小柱固定相極性大于流動相極性的分離模式。

常見的極性固定相有：硅膠，氧化鋁，弗羅里硅土及含有qing基（CN）、氨基（NH2）、二醇基（2OH）的鍵合硅膠。

正相模式下，溶劑體系的極性應按照樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的順序逐漸升高，它們的洗脫強度也逐漸增大。廣州碩譜生物科技有限公司固相萃取柱批發溶劑環境的pH怎么影響化合物在小柱上的保留，為什么我們要關注化合物的pKa值，在C18小柱中需要考慮這些因素嗎。必須保證選擇的樣品溶劑不能將目標物洗脫，選擇的淋洗液應在不洗脫目標物的前提下zui大限度地洗脫干擾物，所以洗脫液應能恰好完全洗脫目標物。

為何 SPE小柱操作強調流速？

SPE小柱填料充填壓實后，形成柱床，當溶劑流過小柱時，速度過快會產生兩個問題：一是對粘結相填料而言，由于流速過快，使其不能充分浸潤舒展，從而使其保持活性降低；二是流速過快會使小柱形成溝槽，使其未充分浸潤，從而降低吸附填料與樣品的接觸面積，影響目標物質的傳質過程，從而降低回收率。當柱流速度為0.5-3.0 mL/min時，通常不會產生溝槽效應，且溝槽的形成與柱床高度有關；當柱流速度為0-3.0 mL/min時，由于橫截面積較大，柱床較低，溝槽效應較小，因而適用于高流速條件下的大體積水樣的富集；當離子交換和特定吸附作用時，填料和分析靶物的作用時間較長，控制流速可保證良好的保留效果。離子交換固相萃取適用于可解離成帶電離子的化合物，其機理是利用帶電荷的目標化合物離子與帶相反電荷的吸附劑之間的靜電吸引力。

保留雜質這種凈化模式多用于食品或農殘的檢測，下面舉個例子：

食品中丙1烯酰胺的檢測，樣品經提后，凈化；

SPE柱：月旭Welchrom? C18E 500 mg/6mL；

活化：5mL甲1醇，5mL水；

上樣：待凈化液，收集；

洗脫：2mL30%甲1醇分次潤洗燒瓶，再上樣，收集，抽干；

合并上樣液和洗脫液，并用30%甲1醇水定容至5mL，并過0.22 μm濾膜，上HPLC檢測。

當我們使用硅膠鍵合填料型色譜柱時，基于色譜知識，了解到硅膠鍵合填料一般廠商推薦的 pH值范圍是2-8，那么對于使用硅膠鍵合填料的固相萃取小柱，是否有必要嚴格遵守這一規定？

我們需要了解廠家推薦的pH2-8耐受范圍，是為了保證色譜柱的正常使用壽命，硅膠鍵合相在耐受范圍之外使用時，會導致鍵合相與硅膠基質發生斷裂，從而破壞色譜柱的效力和保持其特性，但我們知道， pH耐受范圍以外的溶劑對色譜柱的影響，主要是一個累積的過程，在這種溶劑的作用下，色譜柱的性能會發生變化，從而使色譜柱的性能發生變化，產生不可逆轉的變化，壽命縮短。5，中性氧化鋁主要通過鋁原子中心與帶有高負電荷的雜原子作用，如：N、O、P、S及富電子的芳香族化合物。SPE小柱和色譜柱之間的一個區別是， SPE是一次性消耗品，在耐受溶劑范圍之外，短時間的溶劑洗滌對小柱的保留特性幾乎沒有影響，而且不會造成保留的顯著差異，因此它使用的 pH值范圍較寬，一般可在 pH值范圍1-10之間使用，而不會造成結果的差異。

常見反相鍵合硅膠吸附劑的類型

C2柱

C2柱的官能團是乙1基( ethyl)。其主要作用力是非極性、極性，第二作用力是陽離子交換。通常，根據待測化合物和填料之間作用力的不同，SPE柱的填料大致分為幾個類型，離子交換、HLB（脂性二乙烯苯和親水性N-乙烯基吡咯烷酮）、C18、硅膠、弗羅里硅土、中性氧化鋁等，而作用力大致包括離子鍵、氫鍵和范德華力。因為C2的碳鏈十分短，使得硅膠上的硅羥基(Si-OH)較為暴露在吸附劑表面，從而導致C2具有相當顯著的極性特點。在實際應用中，如果目標物在C8或C18上吸附作用太強，可用C2來取代。C2的極性作用力比CN的略強。

什么是SPE柱SPE柱是在分析前處理中，用于凈化樣品的一種色譜耗材，由于樣品處理液中經常會有大量的雜質（樣品基質），因此對分析結果可能會造成較大的影響，因此針對待測化合物的特性，選擇適當的SPE柱能有效凈化樣品中的雜質。

SPE柱的類型

SPE柱的凈化原理是根據待測化合物和雜質在柱中填料的保留能力差異，起到分離的作用，這也是色譜的重要原理之一。

通常，根據待測化合物和填料之間作用力的不同，SPE柱的填料大致分為幾個類型，離子交換、HLB（脂性二乙烯苯和親水性N-乙烯基吡咯烷酮）、C18、硅膠、弗羅里硅土、中性氧化鋁等，而作用力大致包括離子鍵、氫鍵和范德華力。另外，一般實驗室常用的真空方法，會遇到很多實際問題，如：過濾速度不均、粘稠液體不通過，個別樣品可能還需要手工輔助處理，造成分析方法的變異較大。根據不同的作用力，SPE可選擇吸附待測化合物或者雜質。

固相萃取（SPE）技術是目前十分常見的樣品前處理方法，廣泛應用于食品、環境、生物樣品等諸多領域的檢測。在規格種類繁多的固相萃取柱（SPE小柱）中，聚乙烯吡咯烷酮基質SPE(如常見的HLB小柱)占有重要一席。

這類基質具有良好的水可浸潤性和化學穩定性，表面同時具有親水性和疏水性官能團，從而對各類極性、非極性化合物具有均衡的吸附作用。其吸附能力大，樣品容量高，對大部分有機物的吸附容量增大，回收率也更高，且在吸附后有機物容易被定量洗脫。

固相萃取柱的預處理

在萃取樣品之前，吸附劑必須經過適當的預處理，一足為了潤濕和活化固相萃取填料，以使目標萃取物與固相表面緊密接觸，易于發生分子間相互作用；二是為了除去填料中可能存在的雜質．減少污染。采取的方法是用一定量溶劑沖洗萃取柱。

反相類型的固相萃取硅膠和非極性吸附劑介質，通常用水溶性有機1溶劑如甲1醇預處理，甲1醇潤濕吸附劑表面和滲透鍵臺烷1基相，便于水更有效地潤濕硅膠表面。然后用水或緩沖溶液替換滯留在柱中的甲1醇，以使樣品水溶液與吸附劑表面有良好的接觸，提高萃取效率。針對這個問題，月旭推出了離子交換固相萃取硅膠基質和聚合物基質小柱。正相類型的固相萃取硅膠和極性吸附劑介質，通常用樣品所在的有機1溶劑來預處理。離子交換填料一般用3—5ml。去離子水或低濃度的離子緩沖溶液來預處理。