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發布時間:2020-12-18 07:43  
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經過改造帶有HIS3報道基因的酵母細胞,只有當HIS3被啟動表達才能在缺乏組氨酸的選擇性培養基上生長。HIS3報道基因的轉錄表達是由“誘餌”和“獵物”的相互作用所啟動的。大多數雙雜交系統往往同時使用兩個甚至三個報道基因,其中之一是 LacZ。這些改造后的基因在啟動子區有相同的轉錄因子結合位點,因此可以被相同的轉錄因子(如上述的Gal4蛋白)。通常的處理方式是將DNase-free的RNase溶解于2×SSC(100μg/ml),樣品在溶液中37℃處理60min。
良好的前期標本制備十分重要,這點對于采用秋水仙素刺激得到中期染色體分裂象尤為重要。刺激時間過短或過長都會影響實驗觀察,因此需要耐心摸索作用時間。
蛋白酶K的作用濃度。濃度高了極易影響細胞核形態,造成模糊不清,濃度低了則探針不易進入細胞核,雜交率大大降低。石蠟切片一般要達到10-30min,不要超過半小時,一般來說,20g/L蛋白酶K在50℃下消化20min足矣。