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發布時間：2021-08-28 18:06
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Elisa試劑盒操作步驟
1、固相載體的挑選：許多物質可作為固相載體，如聚乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方式可所以凹孔平板、試管、珠粒等。
2、包被或抗原的挑選：將或抗原吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。
3、 酶標記作業濃度的挑選：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定。然后再固定其它條件或采取“方陣法'，在正式試驗體系里準確地滴定其作業濃度。
4、酶的底物及供氫體的挑選：對供氫體的挑選要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。
Elisa試劑盒操作注意事項
1．Elisa試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按污染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
Elisa試劑盒——Elisa實驗常見問題及解決方案
顯色淡，靈敏度偏低
1 試劑盒未充分平衡 試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）
2 樣品不適合做ELISA檢測 樣品一般選擇培養上清、血漿。其他樣品形式可能不適合做ELISA檢測或者需要優化檢測的條件（例如稀釋液的成分）
3 酶標板在貯存或洗后拍干時過分干燥 防止板過于干燥
4 包被遭到破壞 操作溫和，移液槍不能碰到孔底
5 樣本和孵育條件不合適 按照說明書條件，建議孵育過程中全程振蕩孵育。
6 洗滌浸泡時間過長 按照說明書操作。勿人為增加浸泡時間；
7 偶聯HRP試劑污染 棄去試劑，重新配置
8 錯誤的稀釋偶聯HRP試劑 棄去試劑，重新配置
9 TMB底物孵育時間過短，因非人為因素影響，需要優化孵育時間 確定合適的孵育時間：人為判定-高濃度的標準品出現深藍色；S4-5有淡藍色；機器判定620 nm波長下測定OD值達到0.6-0.65
10 樣本濃度過高或存在基質效應 建議做不同稀釋倍數，確認樣本稀釋倍數。
11 濾光片設置有問題或者波長選擇不對 確認儀器設置及選擇正確的波長檢測。
12 酶標板不適合做ELISA 不能使用細胞培養板，建議使用ELISA高吸附力板子。
不正常的標準曲線
1 錯誤的方法重懸標準品 加入正確量的溶液重懸標準品，重懸充分
2 標準品稀釋錯誤 按照說明書要求稀釋標準品
3 標準品污染 使用一次性的滅菌吸頭， 標準品貯存于2-8 ℃
4 錯誤的倍比稀釋步驟 按照說明書倍比稀釋標準品
5 波長選擇錯誤 TMB為底物和以OPD為底物的試劑盒均有使用，而 前者比色波長為450nm，后者為492nm。雙波長比色分析優于單波長。
6 標準品混用 不同批號試劑勿混用
7 試劑盒在運輸途中時間太長，溫度太高，標準品失活 盡量縮短運輸時間，夏季應放冰塊降溫
8 ELISA未終止而直接檢測450nm和620nm TMB顯色需終止后檢測，否則會出現620nm比450nm讀數高的現象。（數值仍有梯度規律）
