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發布時間：2021-08-12 11:20
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制備色譜能當分析色譜用嗎？
目前，很多客戶的要求都傾向于買一臺液相能同時解決制備和分析的所有問題，那就相當OK。這樣的客戶大多是科研經費緊張，好不容易批下來點錢，不想都花在后期純化和分析上，所以盡量二合一。
在我看來，分析液相和制備液相是通用的，只是精度的差別問題。比如，分析的液相一般流速在0.1～10mL/min，活塞的一個沖程大概是10μL，而普通的制備液相一般都是10～100mL的流速，因此活塞桿的尺寸也會變大，一個沖程差不多是100μL；流速的精度相對來說就差了很多。流速大了，管路也相應的粗了不少，以降低高流速帶來的背景壓力；但這樣的儀器用于分析的話，柱后的擴散現象相當的厲害，即使在色譜柱上達到基線分離的兩個峰，由于柱后擴散的作用，到達檢測器的時候，差不多又會合到一起了；另外就是檢測器的差異，主要是檢測池的大小和狹縫的大小不同帶來的靈敏度的不同。制備儀器一般靈敏度是分析的1/20，以保證大量進樣后，不會超過量程太多而平頭，分不清到底分沒分開了。
倒是有個折中的辦法，就是買分析型的液相，然后接個半制備的色譜柱。半制備就是直徑一厘米的柱子，流速5mL以內，因此這個分析液相能達到；進樣量大約是分析柱的10～20倍，檢測器可能會平頭，沒關系，換個波長，找個吸收較弱的波長當檢測波長就OK了，不是大量制備的話，我想基本可以滿足需要了。
多肽的分離制備,如何上量？如何增大分離度?
反相HPLC應當是很好的分離小肽方法，用CH3CN或CH3OH：H2O（95：5）做流動相，看保留如何，若無保留，建議改用其他色譜方法進行分離。
關于多肽的分離，首先要知道它的分子量大小，然后選擇不同類型的填料，如孔徑的大小。我們先在分析柱（4.6mm內徑）上做一下實驗,找到很大的分離度,這一過程的難度是很大的,要不斷地改變流動相和固定相,然后再線性或非線性放大到制備,放大的倍數按分析柱的實驗結果。分離后可以通過冷凍干燥得到固體。
還可以考慮離子交換來分l離。
反相色譜分離純化后，怎樣除去流動相產品中的TFA和乙腈或其他雜質？
TFA是反相色譜分離中常用的添加劑。可以用凍干的辦法去除，國外許多文獻是這樣報道的。還可以試試離子交換、凝膠層析、甚至透析和超濾，其中，離子交換層析效果比較好，還可以起到濃縮樣品的作用。
首先，凍干的辦法應該可以幾乎完全地除去TFA和乙腈，藥品實驗前盡量先檢測一下凍干品中的殘留量，只要不超過允許范圍，這種辦法是很簡單、有效的。
其次，如果你的藥品的分裝量不大的話(<100ug)，建議你用離子交換層析，盡量裝一個小一點兒的柱子，讓含鹽洗脫峰的蛋白濃度達10mg/mL以上，稀釋后完全符合試驗要求。如果用分子篩，考慮稀釋，盡量也先過一個離子交換。此外可以試試疏水層析。如果產品是堿的話，可能會形成TFA鹽，這樣通過上述方法就無法除去。一般可以用堿水洗，然后將產品萃取出來。或者在里面加入一定量的鹽酸，再干燥后形成鹽酸鹽。
工業制備色譜
工業色譜又稱制備色譜。利少{J組分的差速遷移而實現I.業規模混合物分離的方法它包括一個流動相(被分離的氣相或液相)和一個固定相。兩相在色譜柱r}，進行接觸，在色譜柱‘l，流動相沿固定相流動，由」幾混合物中各組分被固定相滯流程度不同，它們隨流動相移動的速度就不同，因而可使各組分.4.相分離。根據流動相的不}.可，可分為}L相色譜與液相色譜兩類。根據固定相的類型，可分為吸附色譜、分配色iH離子交換色譜、親和色潛‘排I}}L色譜五類。上業色譜可分離選擇性系數非常接近的組分，它適用于熱敏N}物質的分離，對制備高純物質特別有效
