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發布時間:2021-06-22 07:09  
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ELISA試劑盒的應用技術
ELISA檢測試劑盒應用定性夾心檢測技術,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段,分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標準品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM,這些就會與HEV 的多肽抗原結合,并固定在上面,洗板除去其它非特異性和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結合物,經第二次孵育后,酶結合物就會與孵育結合上的HEV IgM相結合,洗板除去未結合的酶結合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育時會發生酶-底物反應,只有那些含有HEV IgM和酶結合物所形成的復合物的孔才會發生顏色變化,加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應,并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgMelisa試劑盒的測試標準, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽性。
Elisa試劑盒操作步驟
1、固相載體的挑選:許多物質可作為固相載體,如聚乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方式可所以凹孔平板、試管、珠粒等。
2、包被或抗原的挑選:將或抗原吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。
3、 酶標記作業濃度的挑選:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定。然后再固定其它條件或采取“方陣法',在正式試驗體系里準確地滴定其作業濃度。
4、酶的底物及供氫體的挑選:對供氫體的挑選要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。
Elisa試劑盒——Elisa實驗常見問題及解決方案
現白板,陽性對照不顯色
1 顯色液變質 更換新的顯色液
2 洗滌液配制有誤 請按說明書所示稀釋倍數配制
3 未加酶結合物而認為已加入 注意不要漏加
4 終止液誤作洗滌液稀釋或當底物液使用 每次加液前均應看清標簽
5 標準品稀釋方法錯誤/或標準品有問題 請按照說明書所示配置說明書,注意單位和稀釋倍數
6 不同試劑盒或不同批號的試劑混用 建議使用同批次試劑盒。不能混用不同試劑盒或不同批號的試劑。