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發布時間:2021-03-08 08:53  
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亞細胞定位技術服務客戶提供:
1、基因序列由我們來全基因合成。
2、載體,我們擴菌后再PCR構建表達載體。
3、表達載體,我們轉化農注射、轉染擬南芥、原生質體。
真核細胞有許多獨立功能的膜結構組件,蛋白質活性和亞細胞定位的動態調節是許多細胞過程的需要。光具有高空間及時間分辨率,被廣泛用于外部觸發生物調節。蛋白質可通過融合感光體獲得光敏方向性,但這種耗時、復雜的基因編輯過程可能會擾亂正常細胞通路,改變蛋白功能和行為。因此需要更小影響蛋白質功能的策略實現蛋白的準確控制。適配體具有優異的分子識別能力,并且方便修飾,設計靈活。使用基于的熒光顯微分析技術,替代傳統的質譜繪圖技術,研究人員使用13993種,定位了細胞間隔和亞結構內的12003種蛋白質,共計完成了13個主要細胞器的蛋白質組學研究。本文中作者發展了基于適配體的光響應納米平臺,并選擇轉錄因子RelA作為實驗對象,一種適配體Apt可高結合活性、特異性識別RelA。
亞細胞定位實驗本質上,既然是熒光雙染技術,蛋白質本身沒有熒光,有多種辦法使它帶上熒光信號,一是GFP(綠色熒光蛋白)融合標記,二是免1疫熒光標記,通過帶有熒光的抗1體直接或者間接識別蛋白。標記完成后在激光共聚焦顯微鏡下觀察熒光信號的疊加情況,如果能與細胞器等Marker蛋白信號重疊則可說明目的蛋白定位情況。很多情況下用GFP(綠色熒光蛋白)融合標記目的蛋白,用熒光抗1體標記細胞器。2.關鍵酶糖酵解途徑中大多數反應是可逆的,但有3個反應基本上不可逆,分別由己糖激酶(或葡萄糖激酶),6-磷酸果糖激酶-1和酸激酶催化,是糖酵解途徑流量的3個調節點,所以被稱為關鍵酶。