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              發(fā)布時(shí)間:2020-12-22 03:38  

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              化學(xué)還原劑:Tris具有三個(gè)同等地位的羥基,可作為一種良好的還原劑。有研究人員利用Tris作為還原劑,在堿性條件下,通過(guò)超聲還原氯金酸溶液,無(wú)需加入其它穩(wěn)定劑,即可制得相對(duì)穩(wěn)定的金納米顆粒,實(shí)現(xiàn)了環(huán)境友好型和生物相容型的金納米粒子合成。實(shí)驗(yàn)條件溫和,操作簡(jiǎn)便易行,而且綠色無(wú)污染,低毒低成本。Tris應(yīng)用廣泛,從實(shí)驗(yàn)室的生物化學(xué)實(shí)驗(yàn),到工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn),再到日常生活用品,都少不了它的身影。而說(shuō)起它的毒性,比起一些令人聞風(fēng)喪膽的試劑算是小菜一碟,但是日久年深的侵蝕也不得不防。Tris可以通過(guò)吸入、攝入、皮膚吸收身體,因此,對(duì)于現(xiàn)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)人員,操作時(shí)戴好手套和護(hù)目鏡不失為一種有效的防護(hù)措施,安全生產(chǎn)方能放心使用。







              Tris緩沖液為弱堿性溶液,DNA在這樣的溶液中會(huì)被去質(zhì)子化,從而提高其溶解性,所以在核酸的溶解及核酸提取中一般也使用Tris緩沖液。需要注意的是,因其配置溶液時(shí)顯堿性,會(huì)吸收部分空氣中能生成碳酸的二氧化碳?xì)怏w,所以需要將盛裝Tris溶液的瓶蓋蓋嚴(yán)。另外Tris溶液對(duì)溫度敏感,每升高1度,pH值下降0.03,配置時(shí)需維持在室溫。





              02、緩沖溶液的選擇與計(jì)算

              為了保證緩沖溶液有足夠強(qiáng)的緩沖能力,在配制緩沖溶液時(shí),需要做到:

              為使共軛酸堿對(duì)的濃度比接近于1,應(yīng)根據(jù)所需要維持的pH范圍選擇合適的緩沖對(duì),使其中的弱酸的PKa等于或接近于所要求的pH。

              例如,生物培養(yǎng)液中需用PH=7.0的緩沖溶液,已知H2PO4-的pKa2=7.21,因此,H2PO4—HPO42-是可以選擇的合適的緩沖對(duì)。如若配制PH=9.0的緩沖溶液,則可選擇NH3·H2O-NH4Cl緩沖對(duì)(pKa(NH4 )=9.25)。






                 蛋白制備及純化過(guò)程中緩沖液的選擇非常重要,合適緩沖液才能保證蛋白的活性和結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。

                    當(dāng)我們純化蛋白時(shí),的就是要保持蛋白在純化過(guò)程中不能失活,或者是盡量降低純化過(guò)程對(duì)蛋白活性帶來(lái)的損失。這就意味著蛋白在整個(gè)純化過(guò)程中要始終保持可溶性和活性。

                     因此設(shè)計(jì)一個(gè)防止蛋解和聚合的蛋白純化緩沖體系就非常重要了,尤其會(huì)凸顯在實(shí)驗(yàn)結(jié)果上。在設(shè)計(jì)緩沖buffer時(shí)應(yīng)考慮以下幾個(gè)因素:pH值、緩沖體系、鹽離子、還原劑和穩(wěn)定劑。其中每一個(gè)因素都要根據(jù)你的目的蛋白進(jìn)行優(yōu)化,并以目的蛋白的活性作為優(yōu)化的評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)。