食品加工公司熒光定量PCR常用指南

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PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數方式增加的，隨著反應循環數的增加，終PCR反應不再以指數方式生成模板，從而進入平臺期。還有，由于PCR反應和檢測都在反應管中進行，樣品污染的幾率大大降低，無需擴增后的實驗操作。在傳統的PCR中，常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測PCR反應的終擴增產物，因此用此終點法對PCR產物定量存在不可靠之處。在real-time Q-PCR中，對整個PCR反應擴增過程進行了實時的監測和連續地分析擴增相關的熒光信號，隨著反應時間的進行，監測到的熒光信號的變化可以繪制成一條曲線。

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在PCR反應早期，產生熒光的水平不能與背景明顯地區別，而后熒光的產生進入指數期、線性期和終的平臺期，因此可以在PCR反應處于指數期的某一點上來檢測PCR產物的量，并且由此來推斷模板i初的含量。生豬屠宰廠(場)連接著生豬產銷等上下游環節，便于“順藤摸瓜”及時發現和追溯潛在風險。為了便于對所檢測樣本進行比較，在real-time Q-PCR反應的指數期，首先需設定一定熒光信號的域值，一般這個域值（threshold）是以PCR反應的前15個循環的熒光信號作為熒光本底信號（baseline），熒光域值的缺省設置是3～15個循環的熒光信號的標準偏差的10倍。

廣州勱博儀器有限公司產品服務包括：非洲病毒檢測、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測、非洲檢測、全自動核酸提取純化系統、病毒核酸提取系統、非洲病毒快速檢測試劑盒。（2）因為熒光素種類以及檢測光源的局限性，從而相對地限制了real-timeQ-PCR的復合式（multiplex）檢測的應用能力。我們的客戶對象是食品企業/公司/廠、食品加工企業/公司/廠、冷凍食品加工企業/公司/廠、養殖場、養豬場、屠宰場、生豬屠宰場。

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熒光定量PCR技術產生并成熟于上世紀90年代，由于該技術實現了PCR從定性到定量的飛躍，能夠對PCR反應的全過程進行實時監控，并且自動化程度高，所以該技術從產生到現在短短的十幾年時間，在科研及檢驗領域獲得了廣泛的應用，成為分子生物學領域不可或缺的一項重要技術。廣州勱博--病毒核酸提取系統銷售一個豬場對進場人員的衣物進行熏蒸消毒，專門制作了一個消毒柜，但由于開始設計不理想，消毒柜太大，無法進入屋內，就放在了舍外。熒光定量PCR技術是在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號隨著PCR反應的積累來實時監控PCR反應的進程，并通過分析軟件對PCR的反應進行檢測分析的技術。系統組成：定量PCR儀、電腦、分析軟件、試劑及耗材。

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進行熒光定量PCR體系的配制時i好在冰上進行，操作環境不用非得在超凈臺中進行，環境安靜整潔都可以。因為每一個梯度要做三個重復，因此先在1ml的無菌離心管中配制好后再分裝入96孔板中。還有的在入舍消毒池中，只是例行把水和火堿放進去，也不攪拌，火堿靠自身溶解需要較長時間，那剛放好的消毒水的作用就不確實了。實驗中我使用過熒光定量八聯管和96孔板，個人推薦96孔板。因為八聯管你需要蓋上蓋子，而且蓋子比較的難按下去，稍不慎就把八聯管弄斷或者液體撒出來。有的時候一下忘記了是從哪邊開始的。96孔板比較方便，加完樣品后只需附上一層膜，用它自帶的板子撫平即可。上機器前i好離心一下，讓貼在管壁上的液體流下來同時也消掉氣泡。

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根據動物防疫法及其配套規章規定，縣級動物衛生監督機構依法向屠宰場派駐(出)官i方獸醫實施屠宰檢疫。廣州勱博--冷凍食品加工企業/公司/廠核酸提取純化一般而言，熒光擴增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數擴增階段和平臺期。按照生豬屠宰檢疫規程和相關規定，屠宰檢疫內容包括傳i染病和寄i生蟲病，檢疫流程包括生豬進入屠宰廠(場、點)監督查驗、檢疫申報、宰前檢查、同步檢疫、檢疫結果處理以及檢疫記錄等。在非洲防控期間，官i方獸醫監督屠宰企業開展非洲自檢，對沒有開展自檢的屠宰企業，對屠宰后的生豬產品一律不得出具動物檢疫證明。

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實時熒光定量PCR(real-time quantitativePCR)/QRT-PCR，是指在PCR反應體系中加入熒光標記物，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，后通過擴增曲線對未知模板進行定量分析的方法。廣州勱博--博日養豬場全自動核酸提取純化系統實時熒光定量PCR的基本原理：理論上，PCR過程是按照2n（n代表PCR循環的次數）指數的方式進行模板的擴增。一般用于mRNA轉錄水平的定量研究、不同樣本或基因組中DNA拷貝數的測定、基因芯片結果驗證、藥i效分析等。金開瑞采用SYBR熒光染料法及TaqMan探針法進行熒光定量PCR檢測，從引物設計到檢測一次性完成，提供2種常用的內參引物及免費的專業數據分析，每個樣品設置至少三個平行對照，保證結果的準確可靠。