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地衣芽孢桿菌對鹽堿地的改良

地衣芽孢桿菌對鹽堿地的改良 土壤內鹽分積累的危害 土壤結構黏滯，通氣性差，容重高，土溫上升，好氣性微生物活動差，養分釋放慢，滲透系數低，毛細作用強等，導致表層土壤鹽漬化進一步加劇，造成土壤冷、 硬、板現象。一般說來，當土壤表層或亞表層中的水溶性鹽類累積累超過 0.1％，或 土壤堿化層的堿化度超過 5％，就屬于鹽漬土。鹽堿地對植物的危害 a、引起植物的生理干旱。此外由于地衣芽孢桿菌無致病性，并可以分泌多種酶和，而且還具有良好的發酵基礎，所以用途十分廣泛。過多的可溶性鹽類，可提高土壤溶液的滲透壓，引起植物 的干旱。 b、危害植物組織。干旱季節，表土層鹽分過量積聚 易傷下胚軸。在高 pH 值下，還會導致 OH 一對植物的直接。植物組織內鹽分過量積聚，會使原生質受害，蛋 白質合成受阻，含氮的中間代謝產物積累，造成細胞。 c、影響植物正常營養吸收。由于交換性 Na 的競爭，使植物對鉀、磷和其他營養元素的吸收減少，磷的轉移也會受到抑制，從而影響植物的營養狀況。 d、 影響植物的氣空開閉。在高濃度鹽類作用下， 氣孔保衛細胞內的淀粉形成受到阻礙， 使細胞不能關閉，植物容易干旱枯萎。選擇耐鹽的巨大芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌優勢菌株，生產出生物有機肥，用于植物 生產，在投入成本相同的情況下，植物生長發育良好，產量增加，而且鹽堿地土壤 理化性狀得到改善，土壤微生物數量增多。此外由于地衣芽孢桿菌無致病性， 并可以分泌多種酶和， 而且還具有良好的發酵 基礎，所以用途十分廣泛。在、農業、科研方面都有重要的應用

地衣芽孢桿菌的基因敲除

地衣芽孢桿菌基因敲除的方法在我們過去的中有描述（Cai et al., 2016）。土傳病害發病后，比較難以防治，菌在土壤中越冬，很難被，來年繼續侵害作物，如此循環，病害越來越嚴重。在這里，以構建cydB缺陷菌株為例。簡言之，以地衣芽孢桿菌WX‐02基因組DNA為模板，采用引物cydB‐KF1/R1和cydB‐KF2/R2擴增得到cydB基因的上游和下游同源臂，經重疊擴展(SOE)‐PCR得到融合片段。融合片段入到限制酶位點XbaI/SacI酶切后的T2(2)‐Ori中。菌落PCR和DNA測序證實重組質粒(T2‐cydB)構建成功。

將重組質粒T2‐cydB電轉化至WX‐02，通過菌落PCR和質粒抽提證實轉化成功。陽性轉化子首先在含20mg/L卡那的LB培養基中， 45℃條件下培養促進單交換發生，然后在無卡那培養基中37℃培養。那敏感菌落經菌落PCR驗證，獲得雙交換轉化株。這個突變株經DNA測序后證實，并命名為WXΔcydB。1、生防機制對植物病菌的作用機制和方式是多樣的,主要包括競爭作用、抗生作用、溶菌作用和促進植物生長等幾個方面。其他的基因（ythA, ctaC, qoxA, cydC, narG, nasC, resD）的敲除采用相同的方法。