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基因的分子手術是相當復雜的過程，其中zui重要的是連接酶

互補堿基之間的配對，形成雙鏈。并在DNA連接酶的作用下，使同一DNA分子的兩端連接成環狀，或使兩個分子連成一大的線狀分子。不同限制性內切酶切割DNA產生的三種不同類型的末端。

基因的分子手術是相當復雜的過程，除了需要限制性內切酶外，還需要其他- -些工具酶包括連接酶、DNA 聚合酶、RNA聚合酶、核酸酶、末端修飾酶等，對DNA或RNA進行各種各樣的修飾。其中zui重要的是連接酶。

DNA 連接酶是生物體內重要的酶，其所催化的反應在DNA的copy和修復過程中起著重要的作用。DNA連接酶分為兩大類:一類是利用ATP 的能量催化兩個核苷酸鏈之間形成磷酸二酯鍵的依賴ATP的DNA 連接酶，另一類是利用煙酰胺腺piao呤二核苷酸(NAD ) 的能量催化兩個核苷酸鏈之間形成磷酸二酯鍵的依賴NAD* 的DNA 連接酶。

DNA連接酶（DNA Ligase）也稱DNA黏合酶，在分子生物學中扮演一個既特殊又關鍵的角色，那就是連接DNA鏈3‘-OH末端和，另一DNA鏈的5’-P末端，使二者生成磷酸二酯鍵，從而把兩段相鄰的DNA鏈連成完整的鏈。連接酶的催化作用需要消耗ATP。

cDNA是指具有與某RNA鏈呈互補堿基序列的DNA。與RNA鏈互補的單鏈DNA，以其RNA為模板，在適當引物的存在下，由依賴RNA的DNA聚合酶（反轉錄酶）作用而合成，并且在合成單鏈cDNA后，再用堿處理除去與其對應的RNA以后，以單鏈cDNA為模板，由依賴DNA的DNA聚合酶或依賴RNA的DNA聚合酶作用合成雙鏈cDNA。在這種情況下，mRNA的cDNA，與原來的基因組DNA相同而且無內含子；相反地，對應于在原來基因中沒有的而在mRNA存在的3'末端的poly A序列等的核苷序列上，與外顯子序列、先導序列以及后續序列等一起反映出mRNA結構。