黑龍江流式細胞胃潰瘍模型「英瀚斯」

小鼠精原gan細胞分離富集和培養

成年小鼠gao丸中約有108個細胞,其中約有 2×104個是精原gan細胞,僅占gao丸生精上皮細胞總數的 0.02～0.03%,精原gan細胞數量太少不利于體外培養.分離和富集精原gan細胞成為精原gan細胞體外培養能否成功的前提條件.尋找分離和富集小鼠精原gan細胞有效方法. 方法:出生6-8天小鼠為實驗對象,先用0.25%胰酶1mM EDTA消化gao丸10min,用胎牛xue清終止消化,用一次40-um孔徑的濾器過慮制成單 細胞懸液,30%percoll不連續密度梯度法離心富集精原gan細胞,再根椐未分化精原gan細胞表面thy1.2(CD90.2)陽性CD117(c- kit)陰性特點用流式細胞儀將精原gan細胞分選出來,并在體外進行培養嘗試. 結果:30%percoll密度梯度離心前CD117(c-kit)陽性細胞占13.80±3.34%,CD90.2陽性細胞占28.98±4.51%, 二者都陽性細胞占8.98±2.98%,CD117陰性CD90.2陽性細胞占18.36±2.67%;離心后 CD117(c-kit)陽性細胞占12.37±3.34%,CD90.2陽性細胞占56.98±4.51%,二者都陽性細胞占 8.20±3.98%,CD117陰性CD90.2陽性細胞占32.36±3.67%;CD117(c-kit)陽性細胞和二者都陽性細胞所占百分比前后 比較差異無顯著性(P>0.1),CD90.2陽性細胞和CD117陰性和CD90.2陽性細胞所占百分比前后比較差異有顯著性 (P<0.05);采用CD117和CD90.2作為標志分子,percoll離心后細胞懸液經FACS分選后獲得細胞純度

自噬流檢測

自噬是調節真核細鵬生長、和能量代謝的重要生物學機制。細胞自噬行使其生物學功能的前提是自噬流的話化。大量證據表明自噬流受損與多種慢性炎性疾病，特別是、神經退行性疾病及組織纖維化的發病密切相關，目前對于自噬液的檢別是自噬與其相關疾病研究領域的熱點。由于自噬流是一個曲多個步驟組成的動態過程。5ml生物素化抗ti（Bio-Ab）（2μg/ml），37℃孵育1h或4℃過夜，棄掉液體，PBS-T洗滌3次，每次3min。因此往需要精細的突驗才能準確判斷自啦流狀態。

小鼠成骨細胞和破骨細胞共培養模型的建立

細胞之間的相互調控作用奠定基礎.方法利用24 h內新生小鼠顱骨和4~8周齡成年小鼠四肢長分別分離、培養成骨細胞和破骨細胞，采用間接接觸的培養模式將接種了骨sui單核細胞的玻片或骨片置入提前24 h接種了成骨細胞的培養皿中進行共培養.共培養-定時間后進行破 骨細胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP染色鑒定和骨吸收功能檢測，并進一 步采用RT- PCR對破骨細胞標志酶基因基質金屬蛋白酶.9(MMP-9)、TRAP 和組織蛋白酶K (Cathepsin K )的表達進行檢測結果共培養5天后可觀TRAP( )多核細胞形成13天TRAP( )多核細胞數目達到高峰;骨吸收陷窩在共培養7天后開始出現,隨著培養時間的延長,陷窩面積呈增加趨勢;破骨細胞標志基因TRAP在共培養3天時開始表達，而MMP-9和Cathepsin K則在共培養5天后表達結論共培養體系中成骨細胞對破骨細胞調控作用顯著誘導的破骨細胞具有噬骨能力，該共培養模型可用于成骨細胞和破骨細胞之間的相互調控作用研究.