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發布時間：2021-09-02 11:24
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ELISA試劑盒的分類
檢測抗體及酶結合物的稀釋度合適(均為1:30), 方便試驗操作者準確地做稀釋工作，保證實驗結果的重復性。
Elisa試劑盒的注意事項
Elisa試劑盒是否滅活：加熱可滅清中補體系統，在較少數情況下（培養ES細胞，平滑肌細胞時）建議滅活，在培養其余細胞時不建議滅清。滅活非常容易產生沉淀，如必須滅活請按56℃，30 min，輕微搖晃原則操作，滅活溫度高、時間長、搖晃不均都容易產生沉淀。
Elisa試劑盒培養基：無培養基在結果重復性、細胞體外分化方面有優勢，但是，仍然是培養液中基本的添加物，尤其是在原代培養或細胞生長狀態不良時，常常會先使用有的培養液進行培養，待細胞生長旺盛后再換成培養液。
Elisa試劑盒有哪些需要注意的？
1. 跟著病況的進展或由其他因素影響，某些在機體內的含量發作大幅動搖，因此有必要對標本進行預處理。間接法測定中，標本恰當稀釋還可下降非特異性反響。
2. 加樣一般運用加液器，在ELISA試劑盒中一般有4次加樣：加標本、加酶結合物、加底物和加間斷液。加標本時有必要每份標本運用一支移液器吸嘴，避免交叉污染。加酶結合物、底物和間斷液時則不需更換吸嘴。
3.在成批手藝檢測中，還應留神操作時差的影響。加樣及混勻時間的差異，使抗原反響和酶促反響時間不一致，對競爭法及定量檢測影響很大，不留神可能會導致過錯效果或定量不準。
Elisa試劑盒——Elisa實驗常見問題及解決方案
顯色淡，靈敏度偏低
1 試劑盒未充分平衡 試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）
2 樣品不適合做ELISA檢測 樣品一般選擇培養上清、血漿。其他樣品形式可能不適合做ELISA檢測或者需要優化檢測的條件（例如稀釋液的成分）
3 酶標板在貯存或洗后拍干時過分干燥 防止板過于干燥
4 包被遭到破壞 操作溫和，移液槍不能碰到孔底
5 樣本和孵育條件不合適 按照說明書條件，建議孵育過程中全程振蕩孵育。
6 洗滌浸泡時間過長 按照說明書操作。勿人為增加浸泡時間；
7 偶聯HRP試劑污染 棄去試劑，重新配置
8 錯誤的稀釋偶聯HRP試劑 棄去試劑，重新配置
9 TMB底物孵育時間過短，因非人為因素影響，需要優化孵育時間 確定合適的孵育時間：人為判定-高濃度的標準品出現深藍色；S4-5有淡藍色；機器判定620 nm波長下測定OD值達到0.6-0.65
10 樣本濃度過高或存在基質效應 建議做不同稀釋倍數，確認樣本稀釋倍數。
11 濾光片設置有問題或者波長選擇不對 確認儀器設置及選擇正確的波長檢測。
12 酶標板不適合做ELISA 不能使用細胞培養板，建議使用ELISA高吸附力板子。
