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發布時間:2021-01-20 06:29  
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原位雜交是指將特定標記的已知順序核酸為探針與細胞或組織切片中核酸進行雜交,從而對特定核酸順序進行定量定位的過程。原位雜交可以在細胞標本或組織標本上進行。武漢邁斯普生物科技有限公司是一家專業從事生物醫學技術服務、技術咨詢及產品開發的生物技術服務企業。公司坐落于武漢光谷,由3位歸國博士領銜創辦。公司長期致力于建立并完善多項基礎生物技術服務平臺?,F憑借自身技術特色,依托光谷生物城技術產業優勢,面向全國提供的生物技術服務。熒光原位雜交技術是一種重要的非性原位雜交技術,原理是利用報告分子(如生物素、等)標記核酸探針,然后將探針與染色體或DNA纖維切片上的靶DNA雜交,若兩者同源互補,即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。
Fields等人的工作標志雙雜交系統的正式建立。他們以與調控SUC2基因有關的兩個蛋白質Snf1和Snf2為模型,將前者與Gal4的BD結構域融合,另外一個與Gal4的AD結構域的酸性區域融合,由BD和AD形成的融合蛋白一般分別稱之為“誘餌”(bait)和“獵物”或靶蛋白(prey or target protein)。
原位雜交在前。
(1)常規脫蠟入水。
(2)37℃蛋白酶K消化20min,37℃漂洗液充分洗去蛋白酶K。
(3)滴加探針,加蓋玻片,避光、濕盒、37℃過夜孵育。
(4)如果試劑盒允許的話,將試劑盒中洗脫液水浴加溫至37℃震蕩洗脫多余的探針。
(5)加堿性磷酸酶標記的抗1體,37℃孵育半小時,洗去抗1體后顯色。
免1疫組化在后。
(1)將顯色后確認為陽性的切片充分漂洗。
(2)在PH為6.0的枸櫞酸鈉溶液中,微波至96℃左右,作用10min。
(3)滴加一抗,37℃濕盒孵育2h。
(4)充分漂洗切片,滴加二抗,室溫下孵育40-50min。
(5)DAB顯色后,采用PBS中止顯色反應。
(6)不要復染核,不然就蓋住原位雜交信號了。