293t細胞電鏡檢測「多圖」

大鼠主動脈內皮細胞的分離培養

方法：分離大鼠主動脈,直接貼壁于培養皿中,熒光倒置顯微鏡觀察細胞形態,免yi組化Ⅷ因子相關抗原染色鑒定細胞.結果:約24小時組織塊邊緣有游離的 新生細胞長出,7天即融合成片.消化傳代后細胞呈短梭形或三角形,單層生長,鋪路石狀,Ⅷ因子表達陽性,呈指數增殖.凍存后復蘇細胞活性均超過90%.結 論:用貼壁法成功建立了大鼠血管內皮細胞體外培養方法,凍存細胞存活率高,為體外研究提供了穩定的模型.

雜交瘤細胞基因測序

雜交瘤細胞有丟失高特異性高活性的風險，或者細胞狀態不好乃至。而經過雜交瘤測序，可以獲得相應的序列，可以以重組蛋白的方式來穩定獲得；從而使得研發或生產者不必以雜交瘤細胞為載體保留該，而可以以堿基序列的形式進行保存和傳播交流、鑒定。同時還可以使用獲得的測序結果進行等知識產權方面的申請審批。接種細胞的密度每平方厘米不超過35個，一般6cm的平皿接種1000個細胞。有時為了進一步大規模生產或進行人源化等生物工程操作/修飾，有必要了解雜交瘤所表達的對應的基因序列以進一步進行生物工程操作與生產。

相較于直接對進行基于蛋白質分析的測序相比，得益于基因測序技術的發展，雜交瘤測序可以提供的結果，防止蛋白測序中如亮氨酸/異亮氨酸較難區分等潛在風險。

細胞培養中常見的污染及解決方法

黑點污染

黑色的游動點能穿透濾膜并在空氣中擴散。它們在低倍鏡下顯示為黑色圓點，在高倍鏡下顯示為可移動的黑點。培養液也不渾濁，一般影響較小，因此細胞仍可使用。電鏡下凋亡細胞表現為染色質凝集、核濃縮、核裂解、胞漿收縮和胞膜具有發泡現象及凋亡小體出現等。通常，黑點污染后，細胞生長良好，運動物體無明顯增加，培養基的顏色和透明度無明顯變化。在同一批培養的細胞中也可以發現類似的現象。

解決方法：黑點對細胞生長狀態沒有明顯影響，細胞增殖后會自然消失，因此除了置換外，無需特殊處理。如果細胞可能被小的運動點污染，建議增加培養皿細胞密度，以提高細胞存活率。

細胞凍存有哪些注意事項？

細胞培養的傳代及日常維持過程中，在培養器具、培養液及各種準備工作方面都需大量的耗費，而且細胞一旦離開開始原代培養，它的各種生物特性都將逐漸發生變化并隨著傳代次數的增加和體外環境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進行細胞凍存十分必要。(4)緩慢將細胞懸液加入預先裝有5mL淋巴細胞分離液的15mL離心管內，保持細胞懸液在淋巴細胞分離液上層，注意不要攪動液面,保持二者分層界面。細胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;細胞儲存在液氮中，溫度達-196℃，理論上儲存時間是的。

細胞凍存的步驟：

配制含 10%DMSO 或甘油、10~20% 小牛的凍存培養液;

取對數生長期的細胞，去除舊培養液，用 PBS 清洗。

去除 PBS，加入適量胰蛋白酶 (覆蓋培養皿表面) 把單層生長的細胞消化下來;

離心 1000rpm，5min;

去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的終密度為 5×106/ml~1×107/ml;

將細胞分裝入凍存管中，每管 1~1.5 ml;

在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者;

凍存:標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/ min;當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。大鼠gu髓間充質gan細胞的分離操作方法(1)取SD大鼠(2周齡)，頸椎脫臼法處死后立即用75%乙醇浸泡，移入超凈工作臺內，用大頭針固定大鼠四肢于工作臺面的泡沫板上。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱 2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。