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發布時間:2020-12-21 02:38  
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擴增反應混合物配制和擴增區
該區域主要進行的操作為DNA擴增。此外,已制備的DNA模板 (來自樣本制備區)的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區)制備成反應混合液等也可在本區內進行。
本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區內的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內進行。
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PCR實驗室分為四個區域(試劑配制區-sample 處理區-nucleic酸擴增區-product分析區)。進入每個工作區域嚴格按單一方向進行,不同的工作區域使用不同的工作服(如不同的顏色)。工人離開每個工作區時不允許脫下工作服。如果使用熒光PCR儀,擴增室和產物分析室可以合并。為避免交叉污染,進入各個工作區域必須嚴格遵循單一方向進行并有響應壓力要求。
PCR建設應該設立專用走廊,目的是將實驗室與其他區域分開,防止交叉污染。鑒于本次新冠檢測,要求人員采取三級防護,基本上比平時BSL-2實驗室防護多出一道(雙層防護)。所以,樣本制備間(BSL-2)的緩沖間宜適當擴大,用于脫卸第二層(內層)防護服、帽子、口罩和手套等防護用品之所。
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PCR實驗室的相關設置:要完成一組PCR實驗,通常需要經過試劑配制、樣品處理、核酸擴增和產物分析4個實驗過程。
這4個實驗過程的實驗用房應相鄰布置,組成一個獨立的PCR實驗區。標準的PCR實驗區包括:試劑準備區、標本制備區、擴增區、產物分析區、各區配套的緩沖區及公共走廊。
PCR實驗室整體平面布局
某醫院PCR實驗室平面布局,整個區域有一個公用走廊,每個獨立實驗區設有專門的緩沖區。通過壓差控制,使整個PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染,并且降低擴增產物對人員和環境的污染。
PCR實驗室應相對獨立,盡量避免與其他普通實驗套疊或者有通道上的交叉。之前看過一個圖,他們的PCR實驗室設置在檢驗科的里面,醫廢和標本的運送要穿過檢驗科的整個走廊,這種情況人、物流、污物均在同一個通道,感ran風險較高,應盡量避免。
PCR實驗室應設置以下區域:試劑儲存和準備區、標本制備區、擴增區、擴增產物分析區。這個4個區域在物理空間上必須完全獨立,各區域無論是空間上還是在使用中,應當始終處于完全的分割狀態,不能有空氣的直接相通。根據使用儀器的功能,區域可以適當合并。每個區域間設置傳遞窗,要求一側打開時另一側無法打開。
4個區域應設置獨立的緩沖間,應設置可以通到四個操作區域的PCR走廊,在進入各區域前,應設置更衣間,每個區域的衣服可用不同顏色進行區分,在清潔區應設置洗澡間、衛生間、值班室。還應考慮到醫廢和標本的運送通道。