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發布時間:2021-06-15 05:01  
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豬流行性腹瀉病毒和非洲病毒都具有在豬源原料中存活的能力;然而,作用機制目前尚不清楚。根據應對流行性腹瀉病毒的經驗,在不影響動物性能和飼料成本的情況下,替換原料的可行性使得很多生產者不再使用豬源原料。研究表明熱工過程可以殺滅病毒(如流行性腹瀉病毒),但這只能作為緊急緩解措施,因為這要求產品在干燥和運輸過程中必須不存在交叉污染。而熒光定量PCR可以在反應進行過程中進行累積擴增產物的分析和檢測,即“實時”。如果生產者認可排除豬源原料是可行的,那么還應該考慮到那些間接的豬源原料,像添加劑、基礎混合物和那些可能源于豬源的動物蛋白或脂肪等。
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首先,養豬場(戶)真正了解所使用的飼料原料的供應鏈非常重要。包括:從誰那里購買了原料?他們又從哪里買到?在運輸中是否與其他原料混雜或混合?每個中轉地點的生物安全政策是什么?這些對于正確評估原料攜帶外來動物疾病的風險非常重要。其次,飼料廠要注重生物安全。在不使用時蓋住接收坑,有效地控制害蟲,防止灰塵收集系統中的灰塵再循環回到飼料中,并管理好整個工廠的人員移動。后,養豬場和飼料廠要考慮監測環境,以實現生物安全合規性。環境監測在人類食品和寵物食品行業已經成為常規舉措,可以幫助人們發現生物安全計劃中的薄弱環節。廣州勱博--冷凍食品加工企業/公司/廠核酸提取純化一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數擴增階段和平臺期。
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豬肉制品加工企業、生豬產品經營者采購生豬產品應當批批查驗其動物檢疫合格證明、肉品品質檢驗合格證明以及非洲病毒檢測結果(報告),確保購進的生豬產品不帶非洲病毒;采購的進口生豬產品應附有合法的入境貨物檢驗檢疫合格證明。不得采購沒有非洲病毒檢測結果(報告)及未經檢疫或者檢疫不合格的生豬產品,確保豬肉制品和經營的生豬產品不含非洲病毒。廣州勱博--養殖場PCRPCR檢測同熒光PCR類似,都是使用的引物和探針以VP72編碼區域作為靶基因設計,該基因研究清楚,且高度保守,即使在滅活或降解的樣品中也可檢測到已知所有22種p72病毒基因型的多個毒株。
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所謂real-time Q-PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在real-time 技術的發展過程中,兩個重要的發現起著關鍵的作用:(1)在90年代早期,Taq DNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發現,它能降解特異性熒光記探針,因此使得間接的檢測PCR產物成為可能。(2)此后熒光雙標記探針的運用使在一密閉的反應管中能實時地監測反應全過程。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯i仿相,中間層以及無色水相上層。這兩個發現的結合以及相應的儀器和試劑的商品化發展導致real-time Q-PCR方法在研究工作中的運用。
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在real-time Q-PCR技術中,無論是相對定量還是標準曲線定量方法仍存在一些PCR定量方法均有的問題有待解決。在標準曲線定量中,標準品的制備是一個必不可少的過程。目前由于無一統一標準,各個實驗室所用的生成標準曲線的樣品各不相同,致使實驗結果缺乏可比性。實時熒光定量PCR技術于1996年由美國AppliedBiosystems公司推出,由于該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點。此外,用real-time Q-PCR來研究mRNA時,受到不同RNA樣本存在不同的逆轉錄(RT)效率的限制。在相對定量中,其前提是假設內源控制物不受實驗條件的影響的,合理地選擇合適的不受實驗條件影響的內源控制物也是實驗結果可靠與否的關鍵。
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與傳統的PCR技術相比,Real-time Q-PCR的不足之處是:(1)由于運用了封閉的檢測,減少了擴增后電泳的檢測步驟,因此也就不能監測擴增產物的大小;該技術是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現其定量功能的。(2)因為熒光素種類以及檢測光源的局限性,從而相對地限制了real-time Q-PCR的復合式(multiplex)檢測的應用能力;(3)目前real-time Q-PCR實驗成本比較高,從而也限制了其廣泛的應用。
廣州勱博儀器有限公司產品服務包括:非洲病毒檢測、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測、非洲檢測、全自動核酸提取純化系統、病毒核酸提取系統、非洲病毒快速檢測試劑盒。我們的客戶對象是食品企業/公司/廠、食品加工企業/公司/廠、冷凍食品加工企業/公司/廠、養殖場、養豬場、屠宰場、生豬屠宰場。目前,對一些培養周期長或缺乏穩定可靠的檢測手段的病原體,可以考慮用FQ-PCR檢測,為臨床診斷提供依據FQ-PCR對病原體的檢測克服了免i疫學檢測的“窗口期“問題,可判斷疾病是否隱性或亞臨床狀態。
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傳統的PCR定量是應用終點PCR來對樣品中的模板量進行定量,通常用凝膠電泳分離,并用熒光染色來檢測PCR反應的終擴增產物。但在PCR反應中,由于模板、試劑、焦磷酸鹽分子的聚集等因素影響聚合酶反應,終導致PCR反應不再以指數形式進行而進入“平臺期”,而且一些反應的終產物比另一些要多,因此終點PCR反應方法定量并不準確。研究表明,每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數的對數存在線性關系,起始拷貝數越多,Ct值越小。此外,終點PCR還容易交叉污染,產生假陽性。
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核酸提取儀原理是,經裂解液裂解后,細胞核中會釋放出核酸分子,會被吸附在磁珠表面,而蛋白質等物質不會被吸附,結合了核酸的磁珠被磁性物質固定在管壁上轉移到洗脫管中,經過反復洗脫,后我們可以得到純凈的DNA。根據其使用范圍可以分為兩類,一種是大型核酸提取儀,另一種是小型核酸提取儀;主要是利用磁珠純化核酸及蛋白質從而達到提取核酸的目的,在細胞、動植物組織等研究方面,一個樣品用一個探針,有效防止樣品之間的交叉污染。還有的在入舍消毒池中,只是例行把水和火堿放進去,也不攪拌,火堿靠自身溶解需要較長時間,那剛放好的消毒水的作用就不確實了。